關(guān)鍵詞:免疫組化實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌免疫組化實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*。
免疫組化實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：   
測序?qū)嶒?yàn)流程：
免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法,、免疫鐵蛋白法,、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
1.洗載玻片:將載玻片置于重鉻酸鉀和濃H2SO4混合液中,目的是為了是載玻片上的硅膠等除去,同時(shí)使一些肉眼看不見的凹凸不平的表面變平整,便于組織吸附,然后置于清水中清洗,除去殘余的重鉻酸鉀和濃H2SO4(大約沖一個(gè)小時(shí)左右),再將載玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37°C溫箱中,，將多聚賴氨酸涂布于玻片的表面,，由于Lys帶正電，而大多數(shù)的組織帶負(fù)電荷,，從而產(chǎn)生吸附作用,。
2.包埋組織:先在鐵模具中加入一些液態(tài)石蠟，先稍微冷卻,，然后再將待包埋的組織置于石蠟之中,，并排列整齊，再將塑料模具盒蓋上,，zui后加入少許液體石蠟,，進(jìn)行冷凍，使石蠟變成固態(tài),。
3.切片：將包埋好的組織從模具上取下來,，并置于石蠟切片機(jī)上，切片機(jī)通過調(diào)節(jié)上下左右來來使組織和切割方向一致,，然后調(diào)節(jié)切片的厚度,，一般為5µm,如果比較難切，則可以適當(dāng)調(diào)整厚度,，用毛筆將切割的載玻片向外拉,，并用小鑷子將包含有完整組織的載玻片置于40°C溫水中。
4.撈組織：當(dāng)組織載玻片置于40°C溫水中之前,，要先將水浴中的氣泡趕走,，以免氣泡受熱上浮而貼到組織上，組織受熱展開,，是組織不起皺紋,，用載玻片撈組織時(shí)，一般取載玻片的下1/3或者下1/2一般每種組織撈5-6張,，其中2-3張是備用的,，每張載玻片上通常撈兩份組織，做對照使用,，這樣形成的誤差就比較小了,，而且撈載玻片的時(shí)候方向一致,，以便觀察，再將撈出來的載玻片置于架子上,，放入37°C溫箱中烘干,。
5.脫蠟：依次將載玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脫蠟作用的主要是二甲苯,依據(jù)的是相似相溶的原理.一般在每個(gè)試劑中放10min,天氣熱可以少放幾分鐘,相反,天氣較冷的話,就要適當(dāng)延長脫蠟時(shí)間,一般為12-15min.
6.抗原修復(fù)：脫蠟后在清水中沖洗一段時(shí)間,，加入3%H2O2浸泡10min,，從而除去內(nèi)源性的過氧化氫酶，然后倒掉H2O2,，在清水中洗兩次,，再加入檸檬酸緩沖液，放入微波爐中蒸煮3min（中火）,，一般剛到沸騰即可,，冷卻至室溫，然后再蒸煮一次,，冷卻至室溫,，蒸煮的目的是為了使抗原的位點(diǎn)暴露出來。
7.血清封閉：冷卻至室溫后,，將檸檬酸緩沖液倒掉,，水洗2次，并將載玻片置于PBS中5min,，洗2次,，擦干組織周圍的PBS液，馬上加上血清,，使一些非特異性的位點(diǎn)封閉起來，然后放入37°C溫箱中半小時(shí),。血清稀釋10倍（900µlPBS：100µl血清封閉液）,。
8.加一抗：將溫箱中的載玻片取出，用吸水紙擦干載玻片反面和正面組織周圍的血清,，加一抗,，如果做對照實(shí)驗(yàn)，就在對照的組織上加PBS,。加完一抗后于4°C冰箱中保存,。
9.加二抗：將載玻片從冰箱中取出，放入PBS中洗3次,，每次5min,，擦干組織周圍的PBS后加上二抗,然后置于37°C溫箱中半小時(shí)。
10.加SABC:將片子從溫箱中取出, 放入PBS中洗3次,，每次5min,，擦干組織周圍的PBS后加上SABC, 然后置于37°C溫箱中半小時(shí),。SABC稀釋100倍（990µlPBS：10µlSABC）。
11.加顯色劑：將片子從溫箱中取出, 放入PBS中洗3次,，每次5min,，擦干組織周圍的PBS后加上顯色劑。（顯色劑的配置：在1ml水中加1滴顯色劑A,，搖勻,，然后加1滴顯色劑B，搖勻,，再加1滴顯色劑C,，搖勻）   A：DAB        B：H2O2        C：磷酸緩沖液
12.復(fù)染：將顯色后的片子用清水沖洗一段時(shí)間后，浸泡于蘇木精中染色,，一般動(dòng)物組織為半分鐘,，植物組織3-5min。
13.脫水：將復(fù)染后的片子置于水中沖洗后,，依次將載玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯,。每個(gè)試劑中放置2min，zui后浸泡在二甲苯中,，搬到通風(fēng)柜中,。
14.封片：用中性樹膠滴在組織旁邊，再用蓋玻片蓋上,，要先放平一側(cè),，然后輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好片子后置于通風(fēng)柜中晾干,。 
免疫組化（Elivision二步法）：
（1）石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時(shí),，脫蠟至水,，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）,。
（2）取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液,，加入微波盒中，微波加熱至沸騰,，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘,，取出微波盒流水自然泠卻,，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次,，之后用PBS沖洗2×3’,。(注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的,，視具體情況而定)
（3）每張切片加1滴3% H2O2，室溫下孵育10分鐘,，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性,。PBS沖洗3×3’。
（4）除去PBS液,，每張切片加1滴相應(yīng)的*抗體（相應(yīng)稀釋倍數(shù)）,，室溫下孵育2小時(shí)。
（5）PBS沖洗3×5’,。除去PBS液,，每張切片加1滴聚合物增強(qiáng)劑（試劑A），室溫下孵育20分鐘,。PBS沖洗3×3’,。
（6）除去PBS液，每張切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物（試劑B）,，室溫下孵育30分鐘,。PBS沖洗3×5’
（7）除去PBS液，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液,，顯微鏡下觀察5分鐘,。
（8）蘇木素復(fù)染，0.1%HCl分化,，自來水沖洗,，藍(lán)化，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,，二甲苯透明,，中性樹膠封固，晾干后觀察,。