關(guān)鍵詞:免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi),。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：   
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法,、免疫酶法、免疫鐵蛋白法,、免疫金法及放射免疫自顯影法等,。
1.洗載玻片:將載玻片置于重鉻酸鉀和濃H2SO4混合液中,目的是為了是載玻片上的硅膠等除去,同時(shí)使一些肉眼看不見的凹凸不平的表面變平整,便于組織吸附,然后置于清水中清洗,除去殘余的重鉻酸鉀和濃H2SO4(大約沖一個(gè)小時(shí)左右),再將載玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37°C溫箱中,，將多聚賴氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys帶正電,，而大多數(shù)的組織帶負(fù)電荷,，從而產(chǎn)生吸附作用。
2.包埋組織:先在鐵模具中加入一些液態(tài)石蠟,，先稍微冷卻，然后再將待包埋的組織置于石蠟之中,，并排列整齊,，再將塑料模具盒蓋上，zui后加入少許液體石蠟,，進(jìn)行冷凍,，使石蠟變成固態(tài)。
3.切片：將包埋好的組織從模具上取下來,，并置于石蠟切片機(jī)上,，切片機(jī)通過調(diào)節(jié)上下左右來來使組織和切割方向一致，然后調(diào)節(jié)切片的厚度,，一般為5µm,如果比較難切,，則可以適當(dāng)調(diào)整厚度，用毛筆將切割的載玻片向外拉,，并用小鑷子將包含有完整組織的載玻片置于40°C溫水中,。
4.撈組織：當(dāng)組織載玻片置于40°C溫水中之前，要先將水浴中的氣泡趕走,，以免氣泡受熱上浮而貼到組織上,，組織受熱展開，是組織不起皺紋,，用載玻片撈組織時(shí),，一般取載玻片的下1/3或者下1/2一般每種組織撈5-6張，其中2-3張是備用的,，每張載玻片上通常撈兩份組織,，做對(duì)照使用，這樣形成的誤差就比較小了,，而且撈載玻片的時(shí)候方向一致,，以便觀察，再將撈出來的載玻片置于架子上,，放入37°C溫箱中烘干,。
5.脫蠟：依次將載玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脫蠟作用的主要是二甲苯,依據(jù)的是相似相溶的原理.一般在每個(gè)試劑中放10min,天氣熱可以少放幾分鐘,相反,天氣較冷的話,就要適當(dāng)延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間,一般為12-15min.
6.抗原修復(fù)：脫蠟后在清水中沖洗一段時(shí)間,，加入3%H2O2浸泡10min,，從而除去內(nèi)源性的過氧化氫酶,，然后倒掉H2O2，在清水中洗兩次,，再加入檸檬酸緩沖液,，放入微波爐中蒸煮3min（中火），一般剛到沸騰即可,，冷卻至室溫,，然后再蒸煮一次，冷卻至室溫,，蒸煮的目的是為了使抗原的位點(diǎn)暴露出來,。
7.血清封閉：冷卻至室溫后，將檸檬酸緩沖液倒掉,，水洗2次,，并將載玻片置于PBS中5min，洗2次,，擦干組織周圍的PBS液,，馬上加上血清，使一些非特異性的位點(diǎn)封閉起來,，然后放入37°C溫箱中半小時(shí),。血清稀釋10倍（900µlPBS：100µl血清封閉液）。
8.加一抗：將溫箱中的載玻片取出,，用吸水紙擦干載玻片反面和正面組織周圍的血清,，加一抗，如果做對(duì)照實(shí)驗(yàn),，就在對(duì)照的組織上加PBS,。加完一抗后于4°C冰箱中保存。
9.加二抗：將載玻片從冰箱中取出,，放入PBS中洗3次,，每次5min，擦干組織周圍的PBS后加上二抗,然后置于37°C溫箱中半小時(shí),。
10.加SABC:將片子從溫箱中取出, 放入PBS中洗3次,，每次5min，擦干組織周圍的PBS后加上SABC, 然后置于37°C溫箱中半小時(shí),。SABC稀釋100倍（990µlPBS：10µlSABC）,。
11.加顯色劑：將片子從溫箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min,，擦干組織周圍的PBS后加上顯色劑,。（顯色劑的配置：在1ml水中加1滴顯色劑A，搖勻，然后加1滴顯色劑B,，搖勻,，再加1滴顯色劑C，搖勻）   A：DAB        B：H2O2        C：磷酸緩沖液
12.復(fù)染：將顯色后的片子用清水沖洗一段時(shí)間后,，浸泡于蘇木精中染色,，一般動(dòng)物組織為半分鐘，植物組織3-5min,。
13.脫水：將復(fù)染后的片子置于水中沖洗后,，依次將載玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每個(gè)試劑中放置2min,，zui后浸泡在二甲苯中,，搬到通風(fēng)柜中。
14.封片：用中性樹膠滴在組織旁邊,，再用蓋玻片蓋上，要先放平一側(cè),，然后輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好片子后置于通風(fēng)柜中晾干,。 
免疫組化SP法步驟：
1.烤片,，68℃，20分鐘,
2. 常規(guī)二甲苯脫蠟,，梯度酒精脫水,；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I(xiàn) 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min 
3.阻斷 滅活內(nèi)源性過氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min，PBS沖洗3X5min,；
4. 抗原修復(fù):置0.01M枸櫞酸緩沖液（PH 6.0）中用煮沸（95℃,，15－20min），自然冷卻20min 以上,，再用冷水沖洗缸子,，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3X5min,。
5. 正常羊血清工作液封閉,，37℃10 min，傾去勿洗.
6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育,，PBS沖洗3X5min（用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照）,；
滴加生物素標(biāo)記二抗, 37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
7. 滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
8. DAB/ H2O2反應(yīng)染色,，自來水充分沖洗后,，
蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明,，干燥,，封片。