關鍵詞:總RNA提取服務|實驗技術服務
簡介：世界*品牌總RNA提取服務|實驗技術服務原裝,，質(zhì)量保證,*,。
總RNA提取服務|實驗技術服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>（一）細胞總RNA的提取 
1,、6孔板細胞匯合度為90-100%時,，取出無菌室，去其上清,，用PBS洗兩次后，每孔加TRIZOL試劑 1 ml,，搖勻,，無菌罩內(nèi)消化3-5 min。
2,、將各孔內(nèi)消化好的細胞裂解液吸到一DEPC處理過的1.5 ml EP管中,，加新開的氯仿0.2 ml，輕搖15 s,。
3,、室溫靜置2-3 min后,，12000 rpm，15 min,，4 ℃,，離心。然后取上清無色水相（約0.6 ml）到 EP管（DEPC處理過）,，加0.5 ml新開的異丙醇,，室溫下靜置10 min。
4,、12000 rpm,，10 min，4 ℃,，離心,。觀察總RNA在管底的白色沉淀，棄去上清,，75%乙醇1.0 ml洗滌（用DEPC水新配制）后,，7500 rpm，5 min,，4 ℃離心,。
5、去上清,，點離,，用小Tip吸干液體。氣干沉淀5-10 min,， DEPC處理水20-30 μl加入,，中槍打勻，55-60 ℃水浴10 min溶解總RNA,，測OD值,。
6、電泳,。
（二）從總RNA中分離mRNA（Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN）
1,、取上述提取的總RNA若干（少于0.25 mg）到一個新的無RNase 的EP管中，用無RNase的水定容到250 μl,。
2,、加入Buffer OBB 250 μl, Oligotex Suspension 15 μl。用Tip打勻或用手彈勻,。
3,、70℃水浴，3 min（裂解RNA的二級結(jié)構）,。
4,、20-30℃條件下,，靜置10 min（讓Oligotex與mRNA結(jié)合）。
5,、高速離心2 min,，小心吸走上清（該上清要保留），留下約50 μl的上清在原管里,。
6,、用Buffer OW2 400 μl重懸含Oligotex/mRNA復合物的沉淀，然后將這些加到套有1.5 ml EP管的SPIN柱子上,，高速離心1 min,。
7、將SPIN柱子移到一個新的EP管上,，加Buffer OW2 400 μl到柱子,，高速離心1 min，丟掉濾過液,。
8,、將SPIN柱子移到一個新的EP管上，加20-100 μl熱的（70 ℃）Buffer OEB到柱子上,，用Tip來回吸打3-4 次,，高速離心1 min。
10,、電泳,。
9、為保證zui大的 mRNA產(chǎn)量,，可再次重復第8步,。
1. 六孔板每孔細胞中加入1ml Trizol，冰上放置5min,，槍頭吹打,。
2.  將各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中，加入氯仿0.2ml/管,，用力振搖15s,。15－30℃下孵育2-3min，離心（4℃,，12,000g,，15min）。
3.  離心后液體分為三層（上層－無色水樣層為RNA,，中層白色為DNA和底層紅色為蛋白質(zhì)），小心吸取上層無色液體移入一新的EP管中,。
4. 加入等體積異丙醇,，0.4－0.5ml,，混勻，15-30℃下孵育10－30min,，離心（4℃,，12，000g,，10min）,。其中如果加入等體積異丙醇后，置于試管架上用PE手套密封后,，放于4℃冰箱中,，沉淀30min效果更好。
5. 去上清,，沉淀加入75％乙醇1ml,，漩渦振蕩30s，離心（4℃,，7,500g,，5min）。
6.  小心去上清,，管內(nèi)沉淀在超凈臺中鼓風靜置干燥3-5min,。是用槍頭吸取上清，盡量除去,。
7. 加入20ul DEPC水溶解,，分裝5ul/管，-70℃冰箱保存,。
8. 細胞總RNA的鑒定：0.9-1.2％瓊脂糖電泳鑒定細胞總RNA,，觀察出現(xiàn)條帶及各條帶亮度。紫外分光光度計測定：分別測定細胞總RNA在260nm和280nm處的光密度值(OD),，并計算RNA的含量和純度,。