關鍵詞:總RNA提取|實驗技術服務
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總RNA提取|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果,。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程：
（一）細胞總RNA的提取 
1,、6孔板細胞匯合度為90-100%時,，取出無菌室，去其上清,，用PBS洗兩次后,，每孔加TRIZOL試劑 1 ml，搖勻,，無菌罩內(nèi)消化3-5 min。
2,、將各孔內(nèi)消化好的細胞裂解液吸到一DEPC處理過的1.5 ml EP管中,，加新開的氯仿0.2 ml，輕搖15 s,。
3,、室溫靜置2-3 min后，12000 rpm,，15 min,，4 ℃，離心,。然后取上清無色水相（約0.6 ml）到 EP管（DEPC處理過）,，加0.5 ml新開的異丙醇，室溫下靜置10 min,。
4,、12000 rpm，10 min,，4 ℃,，離心。觀察總RNA在管底的白色沉淀，棄去上清,，75%乙醇1.0 ml洗滌（用DEPC水新配制）后,，7500 rpm，5 min,，4 ℃離心,。
5、去上清,，點離,，用小Tip吸干液體。氣干沉淀5-10 min,， DEPC處理水20-30 μl加入,，中槍打勻，55-60 ℃水浴10 min溶解總RNA,，測OD值,。
6、電泳,。
（二）從總RNA中分離mRNA（Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN）
1,、取上述提取的總RNA若干（少于0.25 mg）到一個新的無RNase 的EP管中，用無RNase的水定容到250 μl,。
2,、加入Buffer OBB 250 μl, Oligotex Suspension 15 μl。用Tip打勻或用手彈勻,。
3,、70℃水浴，3 min（裂解RNA的二級結構）,。
4,、20-30℃條件下，靜置10 min（讓Oligotex與mRNA結合）,。
5,、高速離心2 min，小心吸走上清（該上清要保留）,，留下約50 μl的上清在原管里,。
6、用Buffer OW2 400 μl重懸含Oligotex/mRNA復合物的沉淀,，然后將這些加到套有1.5 ml EP管的SPIN柱子上,，高速離心1 min。
7,、將SPIN柱子移到一個新的EP管上,，加Buffer OW2 400 μl到柱子,，高速離心1 min，丟掉濾過液,。
8,、將SPIN柱子移到一個新的EP管上，加20-100 μl熱的（70 ℃）Buffer OEB到柱子上,，用Tip來回吸打3-4 次,，高速離心1 min。
9,、為保證zui大的 mRNA產(chǎn)量,，可再次重復第8步。
10,、電泳,。