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基因工程試劑*0感受態(tài)細胞
貨 號:C1200
規(guī) 格:10×100ul / 20×100ul
保 存:-70℃保存,運輸為干冰包裝,。自收貨之日起液氮保存少一年,,-70℃保存少 6 個月。
產品簡介:
本公司生產的*0 感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌*0 菌株經特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,,可用于DNA的化學轉化,。使用pUC19 質粒檢測,轉化效率可達 10 8 ,,-70℃保存六個月轉化效率不發(fā)生改變,。
基因型:F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoR araD139Δ(ara-leu)7697 galU
galK rpsL (StrR) endA1 nupG
特點:一種用于鋪制與培養(yǎng)質粒平板和粘粒平板的重級缺陷的抑制型菌株。其中 φ80lacZΔM15 基因的產物可與 pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現 α-互補,,可用于藍白斑篩選,。該菌株適用于高效的DNA克隆和質粒擴增,能保證高拷貝質粒的穩(wěn)定遺傳,。
操作方法:(以下各步驟均為無菌操作)
1,,將感受態(tài)細胞置于冰上融化,以下實驗以 100ul 感受態(tài)細胞為例,。
2,、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA,注意目的 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一,,輕輕旋轉離心管以混勻內容物,,冰浴放置 30 分鐘。
3,、將離心管置于 42℃水浴中 60-90 秒,,然后快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘,注意不要搖動離心管,。
4,、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基,37℃ 180rpm 振蕩培養(yǎng) 1 小時,。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,,使菌體復蘇。
5,、取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的 SOC 或 LB 平板,,37℃倒置培養(yǎng) 12-16 小時。涂布用量可根據具體實驗來調整,,如轉化的 DNA 總量較多,,可取 100ul 左右的轉化產物涂板;反之,,如轉化的 DNA總量較少,,可取 200-300ul 的轉化產物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長,。如果預計的克隆較少,,可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中,。涂布剩余的菌液可 4℃保存,,如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事項:
1,、感受態(tài)細胞應保存在-70℃,,不可反復凍融,否則其轉化效率將會降低,。
2,、實驗過程中應嚴格無菌操作,防止其它 DNA 或雜菌的污染,,避免為以后的篩選,、鑒定帶來影響。
3,、轉化時,,轉化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內成正比,,但當加入的外源 DNA 量過多或體積過大
反而會降低轉化效率。轉化時 DNA 體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一,。
4,、轉化率的計算:轉化率=產生菌落的總數/鋪板 DNA 總量。
5,、為防止轉化實驗不成功,,可以保留部分連接產物,以重新轉化,,將損失降到低,。
相關產品:
I1020 IPTG 溶液 (50mg/ml)
A1170 氨芐青霉素儲存液 (100mg/ml)
K1030 Kanamycin (100mg/ml) 卡那霉素
L1015 LB 固體培養(yǎng)基 ( 干粉 )
L1020 SOC 液體培養(yǎng)基 ( 干粉)
基因工程試劑*0感受態(tài)細胞訂購說明:
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運輸說明:
1、極低溫產品:極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸,。用干冰把產品包裹起來,,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,,放入索萊寶的箱子,,然后交付給合作快遞,,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩(wěn)定如一,,為您的實驗保駕護航,。
2,、低溫產品:低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸,。事先用冰袋把產品包裹起來,再使用泡沫盒密封,,用膠帶嚴實密封泡沫盒,,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,,安全快速高效放心的送客戶的手中,,保證產品的性質穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航,。
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