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P8630 大鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液試劑盒
規(guī)格：200ml
保存：常溫

索萊寶 大鼠淋巴細(xì)胞分離液 P8630

Lymphocyte Separation Medium （Rat） 

P8630 大鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液試劑盒
P8630-200 200ml           
說明：適用于從血液中分離所需細(xì)胞,。
密度：1.0830±0.0001g/ml
儲(chǔ)存條件： 15-25℃避光保存,，啟封后置4℃保存。

本分離液為Ficoll,、羥乙基淀粉550與泛影酸葡jia胺的混合液,。抗凝外周血可在分離液中分層,。離心時(shí),，在Ficoll、羥乙基淀粉的作用下紅細(xì)胞與粒細(xì)胞聚集并迅速沉降,；此時(shí),，淋巴細(xì)胞及其他單個(gè)核細(xì)胞仍處于分離液上層，紅細(xì)胞污染可忽略不計(jì),。大部分血小板可在細(xì)胞清洗低速離心過程中去除,。 其他人及動(dòng)物多種比重細(xì)胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同,，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重,、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。

適用于從動(dòng)物抗凝血液中分離淋巴細(xì)胞,，無菌條件下所分離的淋巴細(xì)胞可用于細(xì)胞培養(yǎng)等,。本品僅供科研使用。

密度：1.0830±0.0001g/ml

本品易感染細(xì)菌,，需無菌條件操作,。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存,。如 4℃保存,，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果,。

產(chǎn)品內(nèi)容：

各種動(dòng)物外周血淋巴細(xì)胞分離液 200mL

全血及組織稀釋液 200mL

細(xì)胞洗滌液 200mL

保存：18℃-25℃保存,，有效期兩年。本品易感染細(xì)菌,，需無菌條件下操作,。無菌條件下操作，啟封后常溫保存,。如4℃保存,，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果,。

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA,、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血,。

2. 在離心管中加入適量分離液（當(dāng)稀釋后血液體積小于3mL時(shí),，加入3mL分離液,；大于等于3mL，加入等體積分離液,。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二,，否則會(huì)影響分離效果），將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,，注意保持兩液面界面清晰,。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上,，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時(shí)間較長,，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正常現(xiàn)象,。）

3. 室溫,，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大,，離心時(shí)間越長,，分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn)速大不超過1200g）,。

4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：上層是稀釋的血漿層,，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細(xì)胞層,，離心管底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞,。

5. 小心的吸取白膜層細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中， 10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞,。250g,，離心10min。

6. 棄上清,，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞,，250g，離心10min,。

7. 重復(fù)步驟6

8. 棄上清,，細(xì)胞重懸備用。

注意事項(xiàng)：

A. 開封前顛倒混勻,，本分離液為無菌產(chǎn)品,，為延長分離液保存時(shí)間，請?jiān)跓o菌條件下啟封,，避免微生物污染,。,。

B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低,，可將分離液預(yù)熱,。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重,。 

C. 血液樣本為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)）,，為保持淋巴細(xì)胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏,。

D. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞,，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液,，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集,，大大降低細(xì)胞得率及純度。

E. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用,，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁,，影響分離效果。

F. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異,，可能會(huì)影響分離效果,，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，

G. 吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加,；吸取過多的血漿層可能會(huì)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞中血漿蛋白及血小板污染,。

H. 如果要進(jìn)一步對分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過程中,，注意無菌操作,，避免微生物污染。

I. 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同,，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重,、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。