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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BC1175 | 應用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
| 主要用途 | GSH是細胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì),在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護和氨基酸跨膜運輸?shù)?/td> |
還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試（微量法）說明書
微量法
貨號：BC1175
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體1 瓶,，100mL,，4℃保存,。
試劑二：液體1 瓶,，20 mL，4℃保存,。
試劑三：液體1 瓶,，8 mL，4℃避光保存,。
標準品：粉劑1 支,，10mg，4℃避光保存,。
還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試（微量法）產(chǎn)品說明：
谷胱甘肽是由谷氨酸（Glu）,、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）組成的天然三肽，是一種含
巰基（—SH）的化合物,，廣泛存在于動物組織,、植物組織,、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和5,5’-
二硫代-雙-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,，DTNB）反應產(chǎn)生2-硝基-5-巰基苯
甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）,。2-硝基-5-巰基苯甲酸為黃色產(chǎn)物，在波長412nm 處具有
光吸收,。
自備儀器和用品：
分析天平,、微量勻漿器（規(guī)格2ml）、低溫離心機,、水浴鍋,、移液器、可見分光光度計或酶標
儀,、超微量比色皿或96 孔板,。
樣品的處理
1、組織處理：
新鮮組織先用PBS 沖洗2 次,，然后稱取動物組織或者植物組織0.1g,。加入用試劑一潤洗過
的勻漿器中（勻漿器提前放冰上預冷）；然后加入1ml 試劑一（組織/試劑一比例保持不變即可）,，
迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）,；8000rpm 4℃離心10min；取上清液放置于4℃待測,，
若暫時不能完成測試可放于-80℃保存（可保存10 天）,。
2、血液處理
血漿：將收集的抗凝血于4℃,，600g 離心10 分鐘,，吸取上層血漿到另一支試管中，加入等體
積的試劑一,，4℃,，8000g 離心10 分鐘，將上清移入新的試管中放置于4℃待測,，若暫時不能完成
測試可放于-80℃保存（可保存10 天）,。
血細胞：將收集的抗凝血于4℃，600g 離心10 分鐘,，棄去上層血漿用3 倍體積的PBS 清洗3
次（用PBS 重懸血細胞,，600g 離心10 分鐘），加入等體積試劑一,，混勻后4℃放置10 分鐘,，8000g
離心10 分鐘，吸取上清放于4℃待測,，若暫時不能完成測試可放于-80℃保存（可保存10 天）,。
3,、細胞處理
收集不少于106 個細胞，先用PBS 清洗細胞2 次（PBS 重懸細胞,，600g 離心10 分鐘）,，加
入3 倍細胞沉淀體積的試劑一重懸細胞，反復凍融2-3 次（可在液氮中凍結(jié),，37℃水浴中溶解）,，
8000g 離心10 分鐘，收集上清于4℃待測,，若暫時不能完成測試可放于-80℃保存（可保存10 天）,。
操作步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱30min 以上,，分光光度計調(diào)節(jié)波長412nm，蒸餾水調(diào)零,。
2,、試劑二放置37℃（哺乳動物）或25℃（一般物種）水浴中保溫30min。
3,、空白管檢測：取超微量比色皿,，依次加入20μL 蒸餾水，140μL 試劑二,，40μL 試劑三,，混勻，
放置2min 后測定412nm 吸光度A1,。
4,、制作標準曲線
稱1mg 標準品用1ml 蒸餾水溶解，濃度為1mg/ml,。取適當溶液配制濃度為200μg/ml,、100μg/ml、
50μg/ml,、25μg/ml,、12.5μg/ml 的標準品（試劑一十倍稀釋后進行稀釋）。
取1.5mlEP 管依次加入20μL 標準品,，140μL 試劑二,，40μL 試劑三，每管混勻后靜置2min,，檢
測412nm 處吸光度,，吸光度減去空白孔（A1）為橫坐標，根據(jù)吸光度（x）和濃度（y,，μg/ml）做
出標準曲線,。
5,、樣品管測定：取超微量比色皿，依次加入20μL 樣品,，140μL 試劑二,，40μL 試劑三，混勻后靜
置2min 檢測412nm 處吸光度A2,，△A= A2- A1,。
6、酶標儀操作同分光光度計,，操作盡量迅速,。
GSH 含量計算
根據(jù)標準曲線，將樣品△A 帶入公式中（x）,，計算出樣品濃度y（μg/ml）,。
（1）按蛋白濃度計算
GSH（μg / mg prot）=y×V 反總÷V 樣÷Cpr =y×10÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
GSH（μg /g）= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= y×10 ÷W
（3）按細胞數(shù)量計算
GSH（μg /10 4cell）= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量)= y×10 ÷細胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
GSH（μg / mL）= y×V 反總÷V 樣= y×10
V 反總：反應總體積，0.2mL,；V 樣總：上清液總體積,，1 mL；V 樣：加入反應體系中上清
液體積,，20μL=0.02 mL,；W：樣品質(zhì)量，g ,；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL。
注意事項：
1,、樣品處理需勻漿*,，若當天不能完成測量，可放-80℃保存,。
2,、標準品：還原型谷胱甘肽現(xiàn)配現(xiàn)用。
3,、若不確定樣品中GSH 含量的高低,，可稀釋幾個梯度后再進行測量。
4,、因為試劑一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。
相關(guān)文獻:
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《Inhibition of MUC1‐C regulates metabolism by AKT pathway in esophageal squamous cell carcinoma》 作者:Xin GongSun YongQiang Zhao Bin Jiang ZhongWei Xin Mo Shi Liang Song QiMing Qin Qiang Wang XiangYan Liu 期刊:J. Cell. Physiol. 影響因子:4.522 PMID:30523643
《Light-Responsive Metal–Organic Framework as an Oxidase Mimic for Cellular Glutathione Detection》 作者:Yufeng Liu,Min Zhou,Wen Cao,Xiaoyu Wang,Quan Wang,Sirong Li and Hui Wei 期刊:Anal Chem. 影響因子:6.35 PMID:31148448
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