目錄:北京索萊寶科技有限公司>>基因工程>> X1010-1X-gal(20mg/ml)基因工程
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1ml |
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貨號 | X1010 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
主要用途 | IPTG 為安慰性誘導(dǎo)物,X-gal 為生色底物,,二者共同用于藍(lán)白斑篩選 |
X-gal(20mg/ml)基因工程
X-gal溶液(20mg/ml) 此產(chǎn)品為X-gal用DMF溶解過濾后配成的溶液。
X-gal(20mg/ml)基因工程使用方法:
在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中,,加入200 μl的上述溶液、40 μl的IPTG(200mg/ml)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成X-Gal,、IPTG、Amp平板培養(yǎng)基(實(shí)際上X-gal和IPTG可以直接涂抹在平板培養(yǎng)基表面,,干半小時后就可以用,,90mM的平板,X-gal(20mg/ml)涂40ul,,IPTG涂7ul,。150mm的板加倍)??筛鶕?jù)長出菌體的藍(lán)白色,,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。
細(xì)菌藍(lán)白斑篩選原理:IPTG為安慰型誘導(dǎo)物,,可誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶的產(chǎn)生,,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深藍(lán)色的物質(zhì):5-溴-4-靛藍(lán),,有色物質(zhì)可使所在的菌落呈現(xiàn)藍(lán)色,。但當(dāng)含有l(wèi)ac啟動子的質(zhì)粒中插入了外源基因,則不能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶,,因此不能分解X-gal產(chǎn)生藍(lán)色底物,,所在的菌落呈現(xiàn)白色(相對藍(lán)色),這樣的菌落才有可能是我們想要的菌株,。藍(lán)白斑篩選減輕了在篩選陽性克隆菌落時的工作量,。
使用濃度:IPTG濃度:50mg/ml;X-gal濃度:20mg/ml
直接涂板法:取IPTG溶液10l,,X-gal溶液20l滴在培養(yǎng)基上,,同時滴加50~100l無菌水或無菌LB,用涂布棒涂抹均勻,,放表面無水后即可使用,。
預(yù)制板:倒板時,在溫度降50℃后,。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,,混勻后制板即可。
注意:
1,、X-gal不溶于水,,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;
2,、X-gal對光敏感,,含有X-gal的平板應(yīng)該避光保存,,在1~2周內(nèi)使用;
3,、過夜培養(yǎng)后藍(lán)白斑顯示不明顯可將平板放入4℃冰箱中,,一段時間后藍(lán)白斑顯示會比較明顯,便于挑選
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