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Solarbio-RNA病毒基因組提取試劑盒

保存：室溫（15℃-25℃）干燥條件下可保存12個(gè)月,，更長時(shí)間的保存可置于2℃-8℃,。
產(chǎn)品簡介：
本試劑盒適合于從血清,、細(xì)胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因組,，不適合于細(xì)胞等組織內(nèi)RNA病毒基因組的提取,。使用本試劑盒提取的基因組RNA可用于RT-PCR實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
使用前請先在漂洗液中加入一瓶新開啟的無水乙醇,，加入到離瓶口約0.5-1cm距離,，蓋好搖勻。所有離心步驟均在2-8℃條件下進(jìn)行,。
1,、取病毒上清液0.5ml，12000rpm離心5min,，盡量吸盡上清使用,，棄去沉淀（如無沉淀可省去此步）。
2,、向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K,，充分混勻，65℃消化10min,，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,。
3、吸附柱前處理：從包裝中取出吸附柱,，放入收集管中,，加入700ul 洗柱液，室溫放置2分鐘,，2-8℃ 12000 rpm離心2min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中待用,。
4,、向病毒上清中加入500ul結(jié)合液,，充分混勻。再向管中加入400ul無水乙醇,，充分混勻,，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響RNA的提取,，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,，靜置2min。（吸附柱的大容積為750ul,，可分兩次加入,。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。）
5,、12000rpm離心2min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。
6,、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。
7,、向吸附柱中加入500ul漂洗液,，12000rpm離心1min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中,。
8、12000rpm離心2min,，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切,、PCR等。
10,、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,，向吸附膜中央懸空滴加50ul-100ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的RNase free ddH2O，室溫放置5min,，12000rpm離心2min,。即可得到高質(zhì)量的病毒基因組RNA。

Solarbio-RNA病毒基因組提取試劑盒

注意事項(xiàng)：
1,、經(jīng)常更換新手套,。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌,，可能導(dǎo)致RNase污染。使用無RNase的塑料制品和槍頭避
免交叉污染,。
2,、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的RNA提取量也下降,。
3,、若結(jié)合液中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解,。
4,、如果樣品消化不*，后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況,，可適當(dāng)延長離心時(shí)間,。
5、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul,，體積過小會(huì)影響回收效率,。
6、RNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-70℃,，以防RNA降解,。
7、RNA檢測：得到的基因組RNA片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關(guān),。由于病毒不含有核糖體RNA,，所以常規(guī)電泳無法檢測，只有后期實(shí)驗(yàn)才可檢測到,。D260值為1相當(dāng)于大約40 μg/ml單鏈RNA,。

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