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solarbio-DNA病毒基因組提取試劑盒
本試劑盒適合于從血清,、細(xì)胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因組,，不適合于RNA病毒基因組的提取,。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切,、PCR,、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn),。操作步驟： 使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心,。1,、取病毒上清液0.5ml,，12000rpm離心5min，盡量吸盡上清使用,，棄去沉淀,。2、向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K,，充分混勻,，65℃消化10-20min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,。3,、向管中加入500ul結(jié)合液，充分混勻,。再向管中加入400ul無水乙醇,，充分混勻，此時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,，不影響DNA的提取,，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，靜置2min,。（吸附柱的大容積為750ul,，可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心,。） 4,、 12000rpm離心2min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中,。5、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),，12000rpm離心1min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。6,、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。7,、 12000rpm離心2min,，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,， 否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切,、PCR等,。8、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,，向吸附膜中央懸空滴加50ul-100ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,，室溫放置5min，12000rpm離心1min,。9,、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置2min,，12000rpm離心2min,，即可得到高質(zhì)量的病毒基因組DNA。

solarbio-DNA病毒基因組提取試劑盒

注意事項(xiàng):
1,、試劑盒拆封后，蛋白酶K需放置-20℃保存,。
2,、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的DNA段較小且提取量也下降,。
3,、若結(jié)合液中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解再使用,，不影響效果,。
4、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul,，體積過小會影響回收效率,。洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍),，pH 值低于7.0會降低洗脫效率,。DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解,。
5,、DNA濃度及純度檢測：得到的基因組DNA段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關(guān)。D260值為1.0相當(dāng)于大約50 ug/ml雙鏈DNA,、40 ug/ml單鏈DNA,。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,，而使用去離子水,，比值會偏低，因?yàn)閜H值和離子存在會影響光吸收值,，但并不表示純度低,。6,、如果病毒含量過低，后提取的基因組DAN電泳可能無法檢測到,，但PCR等其他實(shí)驗(yàn)還會有結(jié)果,。

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