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D2100-50-通用基因組DNA提取試劑盒
本試劑盒為通用型,，適合于從土壤，糞便,，昆蟲,，以及其他樣本中提取基因組DNA。對(duì)細(xì)菌,，真菌,，昆蟲等樣本都具有很好的裂解效果，大限度的保留了生物DNA的多態(tài)性,。
使用本試劑盒提取的DNA產(chǎn)量大,、完整性好，可直接用于各種常規(guī)操作,，包括酶切、PCR ,、文庫(kù)構(gòu)建,、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇,，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽,。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
1,、樣品的處理：
1）土壤：稱取0.1-0.3g (根據(jù)干濕)土壤,，放入研缽中,，倒入適量的液氮，立即研磨,，重復(fù)3 次,，使土壤顆粒研成粉末，加500ul溶液A,，振蕩*懸浮,。
2）糞便：稱取0.1-0.3g (根據(jù)干濕) 糞便，加500ul溶液A,，振蕩*懸浮,。
3）昆蟲：稱取0.1-0.3g昆蟲，倒入適量的液氮,，立即研磨,，重復(fù)3次，使昆蟲研成粉末,，加500ul溶液A,，振蕩*懸浮。
4）未知樣品,，如為細(xì)未狀,，可直接稱取0.1-0.3g(根據(jù)干濕)加500ul溶液A，如為塊狀,，可0.1-0.3g用液氮研磨成粉未,，再加500ul溶液A，振蕩*懸浮,。
2,、向懸浮液中加入20ul 10mg/ml的RNase A，55℃放置10min,。
3,、加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混勻,，55℃水浴消化,，30min。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,，12000轉(zhuǎn)離心10min,。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。如有沉淀,，可再次離心,。
4、加入500ul溶液B，充分混勻,。如出現(xiàn)白色沉淀,，于55℃放置5min，沉淀即會(huì)消失,，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn),。如
溶液未變清亮，說(shuō)明樣品消化不*,，可能導(dǎo)致提取的DNA量少及不純,，還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子，請(qǐng)?jiān)黾酉瘯r(shí)間,。
5,、加入500ul無(wú)水乙醇，充分混勻,，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,，不影響DNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,，放置2min (分兩次加入,，每次700ul)。
6,、12000rpm離心2min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。
7,、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。
8,、向吸附柱中加入500ul漂洗液,，12000rpm離心1min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中
9,、12000rpm離心2min，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等,。
10、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,，室溫放置5min,，12000rpm離心2min。
11,、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,，室溫放置2min，12000rpm離心2min,，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA.,。

D2100-50-通用基因組DNA提取試劑盒
注意事項(xiàng):
1、由于樣品不同,，終提取的DNA含量和純度也有所不同,，一般來(lái)說(shuō)，如果所提取DNA用電泳的方法檢測(cè)不到,，PCR會(huì)有結(jié)果,，樣品盡可能的新鮮。否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA段較小且提取量也下降,。
2,、若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用,，不影響提取效果,。
3、如果樣品消化不*,，后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況,，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。
4,、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul,，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率；洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響,，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍),，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率；DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,，以防DNA降解,。
5、DNA濃度及純度檢測(cè)（濃度較高時(shí)）：得到的基因組DNA段的大小與樣品保存時(shí)間,、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān),。回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度,。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,， OD260值為1相當(dāng)于大約50μg/ml雙鏈DNA、40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,，而使用去離子水，比值會(huì)偏低,，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值,，但并不表示純度低。

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