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Solarbio-質(zhì)粒小量提取試劑盒
本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,，根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的原理特異性提取質(zhì)粒DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效,、專一地吸附DNA,，可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作,，包括酶切,、PCR,、測序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗,。
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,，加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入）,，混勻,，置于 2-8℃保存。如非指明,，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心,。
操作步驟:
1、取1-5ml細菌培養(yǎng)物,，12000rpm離心1min,，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。
2,、向留有菌體沉淀的離心管中加入250ul溶液Ⅰ(請先檢查是否已加入RNaseA）,，使用移液器或旋渦振蕩器*懸浮細菌細胞沉淀。注意：如果菌塊未*混勻,，會影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低,。
3、向離心管中加入250ul溶液Ⅱ,，溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解,。注意：混勻一定要溫和，以免污染細菌基因組DNA,，此時菌液應(yīng)變得清亮粘稠,，作用時間不要超過5 min，以免質(zhì)粒受到破壞,。
4,、向離心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次,，充分混勻,，此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000rpm離心10 min,，用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個干凈的離心管中,，盡量不要吸出沉淀。注意：溶液Ⅲ加入后應(yīng)立即混合,，避免產(chǎn)生局部沉淀,。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清,。
5,、將上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中）,，室溫放置2min，12000rpm離心1min,，倒掉收
集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中。
6,、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),，12000rpm離心1min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中,。
7、向吸附柱中加入500ul漂洗液,，12000rpm離心1min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。
8,、12000rpm離心2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等,。
9,、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,，室溫放置2min,，12000rpm離心1min。
10,、為了增加質(zhì)粒的回收效率,，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置2min,，12000rpm離心1min,。

Solarbio-質(zhì)粒小量提取試劑盒
注意事項:
1. 使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象,，可在37℃水浴中加熱幾分鐘,，待溶液恢復(fù)澄清后再使用。溶液Ⅱ ,、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應(yīng)立即擰緊蓋子,。
2. 洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50ul，體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍),， pH值低于7. 0會降低洗脫效率， DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,，以防DNA降解,。
3. 如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大于10kb的大質(zhì)粒,，應(yīng)加大菌體使用量,，使用5-10ml培養(yǎng)物，同時按照比例增加溶液Ⅰ ,、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,，吸附和洗脫時可以適當(dāng)?shù)难娱L時間，以增加提取效率,。
4. DNA濃度及純度檢測：得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時間,、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度,。 DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,，OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA、 40ug/ml單鏈DNA,。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水,，比值會偏低,，因為pH值和離子存在會影響吸光值，但并不表示純度低,。

相關(guān)產(chǎn)品：
E1020 EB染色液
D1010 6×DNA Loading Buffer
T1060 50×TAE 緩沖液
T1050 5×TBE 緩沖液
M1070 D2000 plus DNA Ladder
M1400 1kb DNA Ladder
G8142 GoldView II型核酸染色劑(5000×)

相關(guān)文獻:

《A rapid and efficient one-step site-directed deletion, insertion, and substitution mutagenesis protocol》 作者:Deguang Wu,，Xuewu Guo，Jun Lu,，Xi Sun,，F(xiàn)eng Li，Yefu Chen,，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23256925
《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影響因子:2.533 PMID:24951963
《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong,，Guanglu Wang，Cuiying Zhang,，Haigang Tan,，Xi Sun，Mingyue Wu,，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23597844