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Solarbio-質粒小量提取試劑盒
本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,，根據離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA,。離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA,，可大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物,。使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切,、PCR,、測序、連接和轉化等試驗,。
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,，加入體積請參照瓶體上的標簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入）,，混勻,，置于 2-8℃保存,。如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心,。
操作步驟:
1,、取1-5ml細菌培養(yǎng)物，12000rpm離心1min,，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）,。
2、向留有菌體沉淀的離心管中加入250ul溶液Ⅰ(請先檢查是否已加入RNaseA）,，使用移液器或旋渦振蕩器*懸浮細菌細胞沉淀,。注意：如果菌塊未*混勻，會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低,。
3,、向離心管中加入250ul溶液Ⅱ，溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解,。注意：混勻一定要溫和,，以免污染細菌基因組DNA，此時菌液應變得清亮粘稠,，作用時間不要超過5 min,，以免質粒受到破壞。
4,、向離心管中加入350ul溶液Ⅲ,，立即溫和地上下翻轉6-8次，充分混勻,，此時會出現白色絮狀沉淀,。12000rpm離心10 min，用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中,，盡量不要吸出沉淀,。注意：溶液Ⅲ加入后應立即混合，避免產生局部沉淀,。如果上清中還有微小白色沉淀,，可再次離心后取上清。
5,、將上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中）,，室溫放置2min，12000rpm離心1min,，倒掉收
集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),，12000rpm離心1min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。
7,、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。
8,、12000rpm離心2min,，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等,。
9,、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經65℃水浴預熱的洗脫液,，室溫放置2min,，12000rpm離心1min。
10,、為了增加質粒的回收效率,，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置2min,，12000rpm離心1min,。

Solarbio-質粒小量提取試劑盒
注意事項:
1. 使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現混濁，如有混濁現象,，可在37℃水浴中加熱幾分鐘,，待溶液恢復澄清后再使用。溶液Ⅱ ,、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應立即擰緊蓋子,。
2. 洗脫緩沖液體積不應少于50ul，體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌,，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調此范圍),， pH值低于7. 0會降低洗脫效率， DNA產物應保存在-20℃,，以防DNA降解,。
3. 如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10kb的大質粒，應加大菌體使用量,，使用5-10ml培養(yǎng)物,，同時按照比例增加溶液Ⅰ 、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,，吸附和洗脫時可以適當的延長時間,，以增加提取效率。
4. DNA濃度及純度檢測：得到的質粒DNA純度與樣品保存時間,、操作過程中的剪切力等因素有關,。得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應在OD260處有顯著吸收峰,，OD260值為1相當于大約50ug/ml雙鏈DNA,、 40ug/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7-1.9,，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,，而使用去離子水，比值會偏低,，因為pH值和離子存在會影響吸光值,，但并不表示純度低。

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《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影響因子:2.533 PMID:24951963
《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong,，Guanglu Wang,，Cuiying Zhang，Haigang Tan,，Xi Sun,，Mingyue Wu，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23597844