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CA1080 支原體檢測試劑盒

保存：4℃保存，有效期為2年,，Hoechst工作液需要避光保存,。
產(chǎn)品內(nèi)容：
Hoechst 33258工作液
50ml
固定液
50ml
抗熒光衰減封片液
10ml
說明書
1份
CA1080 支原體檢測試劑盒產(chǎn)品簡介：
本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測支原體污染。這種染料會結(jié)合到DNA的A-T富集區(qū)域,，因?yàn)橹гw的DNA中A-T含量高（55％～80％）,，所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點(diǎn),，即為支原體的DNA染色斑,，說明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發(fā)波長為346nm,，大發(fā)射波長為460nm,；Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后，大激發(fā)波長為352nm,，大發(fā)射波長為461nm,。
操作步驟：
貼壁細(xì)胞：
1、被檢細(xì)胞接種于無菌的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,，接種密度為1-2×104,。同時(shí)，接種正常無支原體感染的同種細(xì)胞,，作為陰性對照,。
2、5天后,，先吸去培養(yǎng)液,，再加入1ml的固定液，靜置20min,，
3,、吸去固定液，晾干,。
4,、于每孔中,，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞），37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min,。
5,、吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次,，直接風(fēng)干,。風(fēng)干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋,。
6,、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn),。
懸浮細(xì)胞：
1、收集需檢測的細(xì)胞,，1500rpm,，5min。
2,、將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上,，再加1ml的固定液，靜置20min,。
3,、吸去固定液，晾干,。
4,、于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞）,，37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。
5,、吸去Hoechst 33258工作液,，用無菌水洗滌玻片3次，直接風(fēng)干,。風(fēng)干后加入一滴封固液,，并以蓋玻片覆蓋。
6,、熒光顯微鏡觀察,。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn),。