CA1080 支原體檢測試劑盒 solarbio
貨號：CA1080
保存：4℃保存,，有效期為2年,，Hoechst 工作液需要避光保存。
產(chǎn)品內(nèi)容：
Hoechst 33258 工作液 100mL 200mL
固定液 100mL 200mL
抗熒光衰減封片液 20mL 40mL
說明書 1 份 1 份
產(chǎn)品簡介：
本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測支原體污染,，這種染料會結(jié)合到DNA 的A-T 富集區(qū)域,，因?yàn)橹гw的DNA 中A-T 含量高（55%～80%），所以可將其染色而被檢測到,。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點(diǎn),，即為支原體的DNA 染色斑，說明有支原體污染,。Hoechst 33258 的大激發(fā)波長為346nm,，大發(fā)射波長為460nm；
Hoechst 33258 和雙鏈DNA 結(jié)合后,，大激發(fā)波長為352nm,，大發(fā)射波長為461nm。
操作步驟：
貼壁細(xì)胞：
1. 被檢細(xì)胞接種于無菌的6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,，接種密度為1-2×104,。同時，接種正常無支原體感染的同種細(xì)胞,，作為陰性對照,。
2. 5 天后，先吸去培養(yǎng)液,，再加入1mL 的固定液,，靜置20min，
3. 吸去固定液,，晾干。
4. 于每孔中,，加入1mL 的Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞）,，
37℃避光放置15-20min 或室溫靜置20～30min。
5. 吸去Hoechst 33258 工作液,，加入2mL 滅菌超純水洗滌三次,，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片
液,，并以蓋玻片覆蓋,。
6. 熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn),。
懸浮細(xì)胞：
1. 收集需檢測的細(xì)胞，1500rpm,，5min,。
2. 將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上,，再加1mL 的固定液，靜置20min,。
3. 吸去固定液,，晾干。
4. 于每孔中,，加入1mL 的Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞）,，
37℃避光放置15～20min 或室溫靜置20～30min。
5. 吸去Hoechst 33258 工作液,，用無菌水洗滌玻片3 次,，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液,，并以
蓋玻片覆蓋,。
6. 熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn),。
結(jié)果判斷（參考）：
陰性：僅見細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。
陽性：除細(xì)胞外,，細(xì)胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒,。
注意事項：
1. Hoechst 工作液對人體有害，請注意防護(hù),。
2. 固定液有刺激性氣味,，建議在通風(fēng)櫥進(jìn)行固定。
3. 支原體檢測時,，好用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)2～3 代,，這樣容易避免假陰性結(jié)果。
4. 本試劑盒用于6 孔板檢測時,，可以進(jìn)行50 次檢測反應(yīng),。
5. 檢測支原體污染，可以使用支原體Vero 細(xì)胞,，這樣可以提高檢測靈敏度,，即將被檢測樣品
接種于Vero 細(xì)胞進(jìn)行檢測。
相關(guān)產(chǎn)品：
P2100 10×多聚賴氨酸
S2100 抗熒光衰減封片劑
C0020 Hoechst 33258 染液（即型）
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