在ELISA試劑盒實驗的時候,，我們經(jīng)常會遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度,，容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本中,。這就有可能是基質(zhì)效應導致的結(jié)果,。
什么是基質(zhì)效應呢?
首先我們要知道什么是基質(zhì)，基質(zhì)是指樣品中目標分析物以外的部分,。由于基質(zhì)成分會對分析過程有顯著干擾,，影響分析結(jié)果的準確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱為基質(zhì)效應,。這是ELISA試劑盒開發(fā)和使用中需要避開的雷,。
如何判斷是否是基質(zhì)效應呢?
當單個樣本或少量樣本值低于空白值時，可能是實驗操作出現(xiàn)問題,，這時應增加重復,，進步操作技術。當許多樣本都低于空白值時,，應思考基質(zhì)效應的影響，建立校正曲線予以修改,?；|(zhì)效應的原因錯綜復雜，有可能是樣品中存在的基質(zhì)導致原抗體的聯(lián)絡結(jié)合能力下降,，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象,。導致樣本值無法計算出數(shù)值，或許數(shù)值為負,。
雖然原因復雜，但有方法可以用來評估基質(zhì)效應,。
第一種方法是采用線性稀釋,，一般來講，抗原和捕獲抗體,、檢測抗體之間的結(jié)合作用很強,，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應的非特異結(jié)合的力要弱很多,，如果不斷稀釋樣品,，非特異結(jié)合造成的干擾會逐步減少，測量值也更接近真實值,。沒有基質(zhì)效應時,，無論如何稀釋，測量值都和真實值吻合,。而有基質(zhì)效應時,，稀釋會造成非特異性結(jié)合比例的減少，測量值也相應地產(chǎn)生很大改變,。
第二種方法是摻入回收率實驗，將低,、中和高濃度的分析物摻入到已測定過濃度的樣本中,，摻入前后實測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn),。回收率介于80-120%,，才符合標準,。
那我們?nèi)绾伪苊釫LISA試劑盒實驗中基質(zhì)效應?
基質(zhì)效應可以通過產(chǎn)品研發(fā)階段的優(yōu)化盡可能去消除的。
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