關鍵詞:滑膜細胞原代培養(yǎng)|實驗技術服務
簡介：世界*品牌滑膜細胞原代培養(yǎng)|實驗技術服務原裝，質量保證,*,。
滑膜細胞原代培養(yǎng)|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果,。
產品品牌：   http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程：
一,、實驗材料準備
1.   滑膜組織：將外科手術切下的組織在手術臺上請將標本放入低溫生理鹽水中,，在手術完成時將標本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實驗室。
2.   試劑：4 mg/mlⅠ型膠原酶(α-MEM配制),，培養(yǎng)液(含10%胎牛血清的α-MEM),。
3.   器械：手術器械,。
二、方法
1.   將切下的組織在手術臺上請將標本放入低溫生理鹽水中(靜止),，在手術完成時將標本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實驗室,。
2.  在超凈臺中將標本放入培養(yǎng)皿中,，加入α-MEM洗滌,。
3.  獲得組織切開，仔細辨認于關節(jié)反折處及增生的白色光滑的滑膜組織,，附于關節(jié)軟骨面的增生的血管翳也為滑膜組織(可作另一管消化),，仔細剔除脂肪組織，用α-MEM洗二次(以去除紅細胞),，放在小青瓶中用解剖剪銳性切碎,。
4.   用雙倍獲得組織的體積含有4 mg/mlⅠ型膠原酶的α-MEM消化37℃孵育120分鐘(在此期間震動混勻數(shù)次)
5.   30分鐘后收集*管細胞：細胞懸液經70 μm細胞濾網過濾，用1500-2000轉離心6分鐘,，上清為Ⅰ型膠原酶加入未過濾網的組織,，繼續(xù)用于消化。
6.   離心管底細胞用α-MEM離心洗滌2次,，每次用α-MEM重懸浮后用1500-2000轉,，離心6分鐘，zui后一次用記數(shù)板觀察到有細胞,。細胞zui終懸浮于含有10%胎牛血清的α-MEM中,，接種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
7.  60鐘后收集第二管細胞：細胞懸液經70 μm細胞濾網過濾,，用1500-2000 rpm離心6分鐘,；用α-MEM洗2次，每次用α-MEM重懸浮后用1500-2000 rpm離心6分鐘,，zui后一次用記數(shù)板觀察細胞并計數(shù),。細胞zui終懸浮于α-MEM含有10%胎牛血清中，接種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。
8.   必要時可做第三管細胞收集,；并立即作原代滑膜細胞培養(yǎng)。
9.  每2-3天換液一次,。
注意事項    
1.   用0.25% trypsin或0.25% trypsin＋ 0.02% EDTA 或 collagenaseⅠ或collagenaseⅡ消化細胞或合用,，只有單用collagenaseⅠ有用、,；
2.   機械法很難獲得細胞,；
3.  全培用α-MEM或RPMI1640或DMEM，加10%胎牛血清,。不能用小牛血清,，胎牛血清用國產即可,；
4.  必須用Ca2+-free的PBS。