樣本采集:采集適量人靜脈血,室溫靜置待血液自然凝固后,,離心分離獲取血清樣本,。采血過程需嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范,防止樣本受到污染,。采集后的血清樣本若不能立即檢測,,應(yīng)妥善保存于 - 20℃冰箱,避免反復(fù)凍融,,以免影響抗體活性,。
試劑盒準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,在室溫(20℃ - 25℃)下平衡 30 分鐘,,確保試劑盒內(nèi)各試劑溫度均勻,。同時準(zhǔn)備好移液器、吸頭,、酶標(biāo)儀等實(shí)驗(yàn)器材,,并檢查其性能是否正常,保證檢測過程順利進(jìn)行,。
加樣:將標(biāo)準(zhǔn)品(如有),、待測血清樣本以及空白對照按規(guī)定體積準(zhǔn)確加入微孔板相應(yīng)孔中,,輕輕振蕩混勻,使樣本與包被抗原充分接觸,,隨后在設(shè)定溫度下孵育一定時間,,促進(jìn)抗原抗體反應(yīng)。
洗板:孵育結(jié)束后,,棄去孔內(nèi)液體,,用洗滌液充分洗滌微孔板 3 - 5 次,徹di清除未結(jié)合的物質(zhì),,降低非特異性信號干擾,。每次洗滌后需將微孔板拍干,避免殘留液體影響后續(xù)反應(yīng)結(jié)果,。
加酶標(biāo)抗體:向各孔加入適量酶標(biāo)抗人 IgM 抗體,,振蕩混勻后再次孵育,讓酶標(biāo)抗體與已結(jié)合的軍團(tuán)菌 IgM 抗體充分結(jié)合,。
顯色與終止:加入底物顯色液,,在避光條件下孵育,待顏色變化至合適程度時,,加入終止液終止反應(yīng),,使反應(yīng)停止在最佳檢測狀態(tài),便于準(zhǔn)確讀取結(jié)果,。
結(jié)果判定:立即使用酶標(biāo)儀在規(guī)定波長下測定各孔 OD 值,。若樣本 OD 值大于試劑盒給定的臨界值,則判定為陽性,,表明樣本中存在軍團(tuán)菌 IgM 抗體,;若樣本 OD 值小于等于臨界值,,則判定為陰性,,即樣本中未檢測到軍團(tuán)菌 IgM 抗體。對于具有定量功能的試劑盒,,可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中軍團(tuán)菌 IgM 抗體的具體含量,。
高靈敏度:能夠檢測到極微量的軍團(tuán)菌 IgM 抗體,有助于在感染早期,,抗體水平較低時,,及時發(fā)現(xiàn)感染情況,為早期診斷提供有力支持,。
特異性強(qiáng):試劑盒中的抗原和酶標(biāo)抗體具有高度特異性,,與其他病原體抗體交叉反應(yīng)極小,能準(zhǔn)確識別軍團(tuán)菌 IgM 抗體,,保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,,減少誤診和漏診情況的發(fā)生,。
操作簡便:整個檢測流程相對標(biāo)準(zhǔn)化,操作步驟清晰明了,,經(jīng)過簡單培訓(xùn)的人員即可熟練操作,,適用于各級醫(yī)療機(jī)構(gòu)和實(shí)驗(yàn)室開展檢測工作。
結(jié)果穩(wěn)定:在規(guī)定的保存條件下,,試劑盒內(nèi)各試劑性能穩(wěn)定,,多次檢測同一批樣本,結(jié)果重復(fù)性良好,,為臨床診斷和病情監(jiān)測提供可靠的數(shù)據(jù)支持,。