樣本采集:采集適量人靜脈血,,室溫靜置,,待血液自然凝固后,通過(guò)離心分離獲取血清樣本,。采血過(guò)程必須嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)范,,防止樣本污染。采集后的血清樣本若不能立即檢測(cè),,需妥善保存于 -20℃冰箱,,且要避免反復(fù)凍融,以免影響抗體活性,。
試劑盒準(zhǔn)備:從冰箱取出 ELISA 試劑盒,,在室溫(20℃ - 25℃)下平衡 30 分鐘,確保試劑盒內(nèi)各試劑溫度均勻,。同時(shí)準(zhǔn)備好移液器,、吸頭、酶標(biāo)儀等實(shí)驗(yàn)器材,,并仔細(xì)檢查其性能是否正常,,以保證檢測(cè)過(guò)程順利進(jìn)行。
加樣:將標(biāo)準(zhǔn)品(如有),、待測(cè)血清樣本及空白對(duì)照按規(guī)定體積準(zhǔn)確加入微孔板相應(yīng)孔中,,輕輕振蕩混勻,,使樣本與包被抗原充分接觸,隨后在設(shè)定溫度下孵育一定時(shí)間,,促進(jìn)抗原抗體反應(yīng)充分進(jìn)行。
洗板:孵育結(jié)束后,,棄去孔內(nèi)液體,,用洗滌液充分洗滌微孔板 3 - 5 次,徹di清除未結(jié)合的物質(zhì),,有效降低非特異性信號(hào)干擾,。每次洗滌后需將微孔板拍干,避免殘留液體影響后續(xù)反應(yīng)結(jié)果,。
加酶標(biāo)抗體:向各孔加入適量酶標(biāo)抗人 IgM 抗體,,振蕩混勻后再次孵育,使酶標(biāo)抗體與已結(jié)合的軍團(tuán)菌 IgM 抗體充分結(jié)合,。
顯色與終止:加入底物顯色液,,在避光條件下孵育,待顏色變化至合適程度時(shí),,加入終止液終止反應(yīng),,使反應(yīng)停止在最佳檢測(cè)狀態(tài),便于準(zhǔn)確讀取結(jié)果,。
結(jié)果判定:立即使用酶標(biāo)儀在規(guī)定波長(zhǎng)下測(cè)定各孔 OD 值,。若樣本 OD 值大于試劑盒給定的臨界值,則判定為陽(yáng)性,,表明樣本中存在軍團(tuán)菌 IgM 抗體,;若樣本 OD 值小于等于臨界值,則判定為陰性,,即樣本中未檢測(cè)到軍團(tuán)菌 IgM 抗體,。對(duì)于具有定量功能的檢測(cè),可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中軍團(tuán)菌 IgM 抗體的具體含量,。
高靈敏度:能夠檢測(cè)到極微量的軍團(tuán)菌 IgM 抗體,,有助于在感染早期,抗體水平較低時(shí),,及時(shí)發(fā)現(xiàn)感染情況,,為早期診斷提供有力支持。
特異性強(qiáng):試劑盒中的抗原和酶標(biāo)抗體具有高度特異性,,與其他病原體抗體交叉反應(yīng)極小,,能準(zhǔn)確識(shí)別軍團(tuán)菌 IgM 抗體,保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,,減少誤診和漏診情況的發(fā)生,。
操作簡(jiǎn)便:整個(gè)檢測(cè)流程相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化,,操作步驟清晰明了,經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單培訓(xùn)的人員即可熟練操作,,適用于各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)和實(shí)驗(yàn)室開展檢測(cè)工作,。
結(jié)果穩(wěn)定:在規(guī)定的保存條件下,試劑盒內(nèi)各試劑性能穩(wěn)定,,多次檢測(cè)同一批樣本,,結(jié)果重復(fù)性良好,為臨床診斷和病情監(jiān)測(cè)提供可靠的數(shù)據(jù)支持,。
軍團(tuán)菌肺炎早期診斷:軍團(tuán)菌感染人體后,,機(jī)體最先產(chǎn)生 IgM 抗體。通過(guò)檢測(cè)血清中軍團(tuán)菌 IgM 抗體,,可在感染初期快速診斷軍團(tuán)菌肺炎,,為患者及時(shí)治療爭(zhēng)取寶貴時(shí)間,提高治yu率,。
疫情監(jiān)測(cè)與防控:在軍團(tuán)菌疫情可能爆發(fā)的區(qū)域,,對(duì)人群進(jìn)行血清學(xué)篩查,檢測(cè)軍團(tuán)菌 IgM 抗體,,能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在感染人群,,有效控制疫情傳播,為公共衛(wèi)生防控提供重要依據(jù),。
感染病情監(jiān)測(cè):對(duì)于已確診的軍團(tuán)菌感染患者,,定期檢測(cè)血清中軍團(tuán)菌 IgM 抗體水平,可了解病情發(fā)展及治療效果,。若抗體水平逐漸下降,,提示治療有效;若抗體水平持續(xù)升高或維持在較高水平,,可能意味著感染未得到有效控制,,需調(diào)整治療方案。