高效液相色譜儀(HPLC)是分析實(shí)驗(yàn)室常用的測(cè)試儀器之一，其應(yīng)用越來越廣泛,。此種儀器在使用過程中,，難免會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問題，并將直接影響到所測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和儀器的正常工作,。操作者如果能了解故障的成因,，即可清楚預(yù)防和排除這些故障的發(fā)生，就可正確地使用儀器并最大限度地發(fā)揮儀器的性能,。今天我們要從以下幾個(gè)方面和您分享下在使用高效液相色譜儀中需注意的幾個(gè)問題,。
使用試管的問題
1、試管的潔凈問題
高效液相色譜分析法是一個(gè)很靈敏的分析方法,，如果因使用不潔凈的試管,，便會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。例如,，在用甲醇作溶劑來溶解樣品時(shí),，所用的小試管是用橡膠塞來做蓋子的，因此,，在每次進(jìn)樣時(shí),，都有一個(gè)保留時(shí)間固定的干擾峰存在，后經(jīng)證實(shí),，此干擾峰是由甲醇浸泡橡膠塞而溶下的組分所產(chǎn)生,，換用玻璃試管后，干擾峰消除,。
2,、塑料試管的溶解問題
近年來，一次性塑料試管給試驗(yàn)人員帶來了極大的方便,，但是,，在使用過程中一定要注意有機(jī)溶劑對(duì)試管的溶解現(xiàn)象，在利用此種試管提取樣品時(shí)，有些有機(jī)溶劑(如氯仿等)對(duì)管壁有溶解現(xiàn)象,，這些被溶解下來的物質(zhì)有時(shí)也能在檢測(cè)器上產(chǎn)生信號(hào),，從而干擾樣品的測(cè)定。這時(shí),，可用相同的實(shí)驗(yàn)條件先行試驗(yàn)一下,，看看不含被抽提物時(shí)，提取液在檢測(cè)器上能否產(chǎn)生干擾信號(hào),，如確有干擾信號(hào)存在,，就只能換用耐有機(jī)溶劑的玻璃試管了。
3,、被測(cè)樣品在試管壁上的吸附問題
這個(gè)問題也應(yīng)引起注意,，否則也會(huì)影響測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性，在治療藥物監(jiān)測(cè)(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中,，有些被測(cè)藥物如阿米替林,，丙咪嗪等易吸附在玻璃試管的管壁上，因此,，操作中宜采用聚丙烯管,，為防止提取中吸附現(xiàn)象的發(fā)生，可采用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑,，可有效地防止吸附,。操作進(jìn)樣閥的問題
目前，在分析型高效液相色譜儀中常用的進(jìn)樣閥是7725型進(jìn)樣閥,，其內(nèi)部的六通閥結(jié)構(gòu)使進(jìn)樣操作非常方便,，但是，如果使用不當(dāng),，也會(huì)帶來問題,。例如，在高效液相色譜法的試驗(yàn)過程中,，有時(shí)會(huì)有異常色譜峰的出現(xiàn)以及重現(xiàn)性不好的問題,，這主要是由于操作方法不當(dāng)所引起，要想解決此類問題,，需從以下幾個(gè)方面入手,。
1、進(jìn)樣量的控制
用進(jìn)樣閥來進(jìn)樣時(shí),，閥內(nèi)的樣品環(huán)是定量的，(一般分析型進(jìn)樣閥的樣品環(huán)體積為20ul),，由于進(jìn)樣時(shí),，注射到進(jìn)樣閥內(nèi)的樣品溶液在樣品環(huán)的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快)。因此,，要想使樣品環(huán)中充滿樣品溶液,，從而使用進(jìn)樣閥來準(zhǔn)確地定量,，則必須使進(jìn)樣量大于樣品環(huán)體積的2倍。如果用注射器來控制進(jìn)樣量,，則最大只能注射樣品環(huán)體積1/2的量,，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導(dǎo)致定量分析的誤差。
2,、進(jìn)樣閥的清潔問題
如果樣品環(huán)中有上次進(jìn)樣時(shí)樣品的殘留,，必然會(huì)污染下次注射進(jìn)的樣品，為防止這種現(xiàn)象的發(fā)生,，應(yīng)按下列步驟操作：a.進(jìn)樣閥有2個(gè)位置,，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時(shí),，以注射器將流動(dòng)相注入進(jìn)樣閥內(nèi)清洗幾次,，每次用量大約40ul；b.然后將進(jìn)樣閥板手扳至INJECT位置時(shí),，再以流動(dòng)相清洗幾次,，每次用量還是40ul；c.最后,，再將樣品注射到進(jìn)樣閥里,。
按照上述的步驟操作，可以避免由進(jìn)樣閥引起的污染,，從而使干擾峰消除并提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
3、進(jìn)樣閥溢流管的堵塞
有時(shí),，進(jìn)樣閥的溢流管會(huì)發(fā)生堵塞現(xiàn)象,，向進(jìn)樣閥內(nèi)注射樣品時(shí)，注射針推不動(dòng),。此故障是由于溢流管的堵塞所致,。堵塞的原因多半是由于溶解樣品的流動(dòng)相用的是鹽溶液，而其中的鹽在溢流管的排空端口處結(jié)晶所致,。此時(shí),，可用小燒杯盛少量蒸餾水對(duì)溢流管口稍加浸泡，端口處鹽的結(jié)晶就能被溶解掉,，故障排除,。如能在每次進(jìn)樣完成之后，用蒸餾水反復(fù)沖洗至溢流管中的鹽分全部沖出,，則可避免此故障的發(fā)生,。
