色譜柱為向玻璃管中填入固定相,，以流動相溶劑浸潤后在上方倒入待分離的溶液，再滴加流動相,，因為待分離物質對固定相的吸附力不同,，吸附力大的固著不動或移動緩慢，吸附力小的被流動相溶劑洗下來隨流動相向下流動,，從而實現(xiàn)分離,。

紙色譜

以濾紙條為固定相，在紙條上點上待分離的混合溶液的樣點,，將紙條下端浸入流動相溶劑中懸掛,，溶劑因為毛細作用沿濾紙條上升，樣點中的溶質從而被分離,。

薄層色譜

是在玻璃板上涂以固定相涂層,，然后點樣，下端浸入溶劑,，同樣自下而上分離,。常用于探索柱色譜實驗條件，溶劑和固定相的選擇等,。

常用固定相有石膏,、氧化鋁、蔗糖,、淀粉等,，常用流動相為水、苯等各種有機溶劑,。

色譜柱流動相因素

1.色譜柱流動相pH

不同基質的填料具有不同的pH適用范圍,。常溫下無定形硅膠在純水中的溶解度約為100mg·L-1，且在pH 1～9的范圍內溶解的硅膠量幾乎是常量,，考慮到溶解速度的影響,對于硅膠基質的填料,其所能承受的流動相pH范圍約為1～8,。鍵合相硅膠填料則由于鍵合層的屏蔽作用,使填料對流動相的適應范圍大大增加,，如現(xiàn)在廣泛使用的反相色譜填料C18 (十八烷基硅烷鍵合硅膠),，其pH適用范圍可達2～10。當流動相pH值超出酸性范圍時,，鍵合相易發(fā)生水解而流失,；當流動相pH超出堿性范圍時，會加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子，這兩種反應均是不可逆反應,，特別是在溫度較高（>40℃）的環(huán)境下,，會使柱效迅速降低而報廢。

2.色譜柱流動相變質

當前使用最為廣泛的是硅基鍵合相填料,，當以水溶液作為流動相或流動相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時,，水溶液中或緩沖鹽溶液中會滋生出一些細菌或霉菌，從而堵塞固定相顆粒間的空隙,。特別是對于多元自動比例混合的高效液相色譜儀來說,水相或緩沖鹽相獨立存貯,，因存放時間較長而容易發(fā)生此類問題。

3.色譜柱流動相純度

目前,，廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3～10μm,孔徑在6～10nm,色譜柱在使用中會有大量的流動相通過,如流動相含有微量不溶性雜質顆粒,則很容易在柱頭部位被截留,久而久之,造成色譜柱機械性堵塞,引起柱壓升高而無法正常使用,。