色譜柱為向玻璃管中填入固定相,，以流動(dòng)相溶劑浸潤(rùn)后在上方倒入待分離的溶液，再滴加流動(dòng)相,，因?yàn)榇蛛x物質(zhì)對(duì)固定相的吸附力不同,，吸附力大的固著不動(dòng)或移動(dòng)緩慢，吸附力小的被流動(dòng)相溶劑洗下來(lái)隨流動(dòng)相向下流動(dòng),，從而實(shí)現(xiàn)分離,。

紙色譜

以濾紙條為固定相，在紙條上點(diǎn)上待分離的混合溶液的樣點(diǎn),，將紙條下端浸入流動(dòng)相溶劑中懸掛,，溶劑因?yàn)槊?xì)作用沿濾紙條上升，樣點(diǎn)中的溶質(zhì)從而被分離,。

薄層色譜

是在玻璃板上涂以固定相涂層,，然后點(diǎn)樣，下端浸入溶劑,，同樣自下而上分離,。常用于探索柱色譜實(shí)驗(yàn)條件，溶劑和固定相的選擇等,。

常用固定相有石膏,、氧化鋁,、蔗糖、淀粉等,，常用流動(dòng)相為水,、苯等各種有機(jī)溶劑。

色譜柱流動(dòng)相因素

1.色譜柱流動(dòng)相pH

不同基質(zhì)的填料具有不同的pH適用范圍,。常溫下無(wú)定形硅膠在純水中的溶解度約為100mg·L-1,，且在pH 1～9的范圍內(nèi)溶解的硅膠量幾乎是常量，考慮到溶解速度的影響,對(duì)于硅膠基質(zhì)的填料,其所能承受的流動(dòng)相pH范圍約為1～8,。鍵合相硅膠填料則由于鍵合層的屏蔽作用,使填料對(duì)流動(dòng)相的適應(yīng)范圍大大增加,，如現(xiàn)在廣泛使用的反相色譜填料C18 (十八烷基硅烷鍵合硅膠)，其pH適用范圍可達(dá)2～10,。當(dāng)流動(dòng)相pH值超出酸性范圍時(shí),，鍵合相易發(fā)生水解而流失；當(dāng)流動(dòng)相pH超出堿性范圍時(shí),，會(huì)加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子,，這兩種反應(yīng)均是不可逆反應(yīng)，特別是在溫度較高（>40℃）的環(huán)境下,，會(huì)使柱效迅速降低而報(bào)廢,。

2.色譜柱流動(dòng)相變質(zhì)

當(dāng)前使用最為廣泛的是硅基鍵合相填料，當(dāng)以水溶液作為流動(dòng)相或流動(dòng)相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時(shí),，水溶液中或緩沖鹽溶液中會(huì)滋生出一些細(xì)菌或霉菌,，從而堵塞固定相顆粒間的空隙。特別是對(duì)于多元自動(dòng)比例混合的高效液相色譜儀來(lái)說(shuō),水相或緩沖鹽相獨(dú)立存貯,，因存放時(shí)間較長(zhǎng)而容易發(fā)生此類問(wèn)題,。

3.色譜柱流動(dòng)相純度

目前，廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3～10μm,孔徑在6～10nm,色譜柱在使用中會(huì)有大量的流動(dòng)相通過(guò),如流動(dòng)相含有微量不溶性雜質(zhì)顆粒,則很容易在柱頭部位被截留,久而久之,造成色譜柱機(jī)械性堵塞,引起柱壓升高而無(wú)法正常使用,。