液相色譜儀是屬于易學(xué)難用的儀器,，特別講究“正確使用”和經(jīng)驗。液相工作者接觸最多的是流動相,，也就是流動相，是造成液相色譜各種問題的最主要源頭,。
液相色譜儀最常見的故障一是堵,，二是漏。下面就這兩點分別展開討論,。（注：流動相以甲醇為例，色譜柱以C18為例）

“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高,，直接原因就是流路不暢,。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，最主要原因就是流動相里有雜質(zhì),，雜質(zhì)的主要來源就是細(xì)菌。 
01“堵”的原因：配制流動相時細(xì)菌污染
首先我們要認(rèn)識到，一般的國產(chǎn)甲醇其實不需要額外過濾處理,，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì),，也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除,，真正容易引起問題的,，是水中的細(xì)菌,。
新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會長菌,，而這些細(xì)菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙,，造成柱子很快報廢,。這就是在配制流動相時造成的細(xì)菌污染的原因，解決它的方法很簡單,，就是確保水的可靠性,。這里有兩種方式推薦：
（1）理想的方式當(dāng)然是購買實驗室專用純水機，既方便又可靠,，質(zhì)量也放心。缺點就是價格不菲,。
（2） 成箱購買市售品牌純凈水,，如500ml 一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求,。先隨機抽取一支做一下細(xì)菌平板實驗,，待菌落數(shù)合格方可使用。這樣每次只要單獨開一支即可,，也很方便,。每次成本2 元左右,。
這里特別指出一個細(xì)節(jié)：在絕大多數(shù)書本上，凡談到配制流動相都會談到最后有一個過濾的步驟,。但是從我們長期使用的實際效果來說,，只要能保證水的質(zhì)量，這一步*可以也應(yīng)當(dāng)去除,。原因有以下幾點：
（1）流動相過濾在理論上有好處,，但是實際操作時由于不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染，對于配比復(fù)雜的流動相影響更大,。
（2）流動相過濾在經(jīng)濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元,，且過濾器*是比較容易損壞的設(shè)備,。最主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元,。按一般液相柱的正常使用壽命計算,，過濾片的成本會遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本。
（3）流動相過濾對于工作效率成本不劃算,。使用溶劑過濾器有一個預(yù)清洗、裝備,、使用,、用后清洗，晾干的過程,，至少也有一個小時的時間,。這個成本也不能忽視,。
（4）在實際工作未發(fā)現(xiàn)流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6 年時間沒有做過流動相過濾的工作,，但是和國內(nèi)同行相比較,，在同等使用強度下我們的柱壽命是比較長的。 
02“堵”的原因：使用流動相時的細(xì)菌污染
指的是：流動相剛開始沒有長菌,，在使用時卻產(chǎn)生了細(xì)菌污染,。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習(xí)慣造成的,。
舉簡單的例子：50％的甲醇水流動相，有兩種使用方式,。一種方式是在上機前就配好混合在一起,，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水,。從單純實驗效果來說，后一種有明顯的優(yōu)點：首先是簡單,，不需要實驗者另個計算配比混合,，其次就是比例準(zhǔn)確,，能得到保留時間重復(fù)性的實驗效果。
但是,，它有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細(xì)菌（很多情況下不僅僅用純水作流動相,，而是用緩沖鹽溶液,，本身就是優(yōu)質(zhì)肥料，細(xì)菌長得更迅速）,，一旦有細(xì)菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水,，更要求在每次實驗后把水相換掉,，換成甲醇沖洗干凈，這一點在實際工作中很多人意識不強,，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏,，但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的,。
所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復(fù)性,，也不要用純水溶液作為流動相的一組,。從實際實驗效果來說，我建議用10％的甲醇水代替純水溶液（以前我做過不同比例甲醇水的細(xì)菌總數(shù)實驗,，在5％就基本可以抑菌,，在10％及以上就可以*殺菌了）,，這樣可以有效排除長細(xì)菌的隱患，既可作流動相,，也可沖柱,。就算是在配制流動相時會計算得麻煩一些，但是一次麻煩,，終身受益,。
03 "堵”的原因：不適當(dāng)操作
常見問題的有以下幾種：
（1）在更換零件時選擇的型號有誤,，接口不是很匹配,，在擰緊的時候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞,。
（2）樣品處理液凈化得不干凈，長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
（3）在使用手動六通閥時,，有些人可能由于手勁小的原因,，轉(zhuǎn)動的不到位，于是造成流路形成了死堵,，壓力快速升高超過警戒值,。
（4）在使用金屬管路作出廢液管時,，應(yīng)當(dāng)注意最好廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端放在液面下,。如果位于在液相上且實驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液,，在停機時可能在出口端結(jié)晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見,，但卻的確發(fā)生過,。
“堵”的原因講了不少，現(xiàn)介紹查堵的方法,。
在發(fā)生“堵”的現(xiàn)象后，就需要找出原因,，主要是什么位置發(fā)生了“堵”,。注意，絕大多數(shù)情況下,，整個系統(tǒng)只會有一個地方發(fā)生堵塞,。
查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開,，仔細(xì)觀察壓力數(shù)值，如果某一個部件（柱子除外）裝上和拆下時的壓力差別很大,，可發(fā)展變化判斷,。至于柱的堵塞，可以通過換同樣規(guī)格的柱的壓力是否一致來判斷,。