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高效液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎上,,引用了氣相色譜的理論,,在技術(shù)上,,流動相改為高壓輸送(最高輸送壓力可達4.9´107Pa);色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成,從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜(每米塔板數(shù)可達幾萬或幾十萬),;同時柱后連有高靈敏度的檢測器,,可對流出物進行連續(xù)檢測。
特點
1.高壓:液相色譜法以液體為流動相(稱為載液),,液體流經(jīng)色譜柱,,受到阻力較大,,為了迅速地通過色譜柱,必須對載液施加高壓,。一般可達150~350×105Pa,。
2. 高速:流動相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多,一般可達1~10ml/min,。高效液相色譜法所需的分析時間較之經(jīng)典液相色譜法少得多,,一般少于 1h 。
3. 高效:近來研究出許多新型固定相,,使分離效率大大提高,。
4.高靈敏度:高效液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測器,進一步提高了分析的靈敏度,。如熒光檢測器靈敏度可達10-11g,。另外,用樣量小,,一般幾個微升,。
5.適應范圍寬:氣相色譜法與高效液相色譜法的比較:氣相色譜法雖具有分離能力好,靈敏度高,,分析速度快,,操作方便等優(yōu)點,,但是受技術(shù)條件的限制,,沸點太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應用氣相色譜法進行分析。而高效液相色譜法,,只要求試樣能制成溶液,,而不需要氣化,因此不受試樣揮發(fā)性的限制,。對于高沸點,、熱穩(wěn)定性差、相對分子量大(大于 400 以上)的有機物(這些物質(zhì)幾乎占有機物總數(shù)的 75% ~ 80% )原則上都可應用高效液相色譜法來進行分離,、分析,。 據(jù)統(tǒng)計,在已知化合物中,,能用氣相色譜分析的約占20%,,而能用液相色譜分析的約占70~80%。
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