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(1),、液相色譜分析的流程:由泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng),，然后輸出，經(jīng)流量與壓力測量之后,，導入進樣器,。被測物由進樣器注入，并隨流動相通過色譜柱,，在柱上進行分離后進入檢測器,，檢測信號由數(shù)據(jù)處理設備采集與處理，并記錄色譜圖,。廢液流入廢液瓶,。遇到復雜的混合物分離(極性范圍比較寬)還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似,，不同的是氣相色譜改變溫度,，而HPLC改變的是流動相極性，使樣品各組分在佳條件下得以分離,。
(2),、液相色譜的分離過程:同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動相之間進行的一種連續(xù)多次交換過程,。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù),、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離,。
開始樣品加在柱頭上,，假設樣品中含有3個組分，A,、B和C,，隨流動相一起進入色譜柱，開始在固定相和流動相之間進行分配,。分配系數(shù)小的組分A不易被固定相阻留,，較早地流出色譜柱。分配系數(shù)大的組分C在固定相上滯留時間長,，較晚流出色譜柱,。組分B的分配系數(shù)介于A，C之間,，第二個流出色譜柱,。若一個含有多個組分的混合物進入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數(shù)的不同先后流出色譜柱,，達到分離之目的,。
不同組分在色譜過程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數(shù),、吸附能力,、親和力等是否有差異，這是熱力學平衡問題,，也是分離的首要條件,。其次,，當不同組分在色譜柱中運動時，譜帶隨柱長展寬,，分離情況與兩相之間的擴散系數(shù),、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動相的流速等有關,。所以分離終效果則是熱力學與動力學兩方面的綜合效益,。
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