PSGro人iPSC/ESC胚胎干細胞無血清培養(yǎng)基支持在細胞外基質蛋白(如BD Matrigel™)上的人iPSCs或人ESCs的無飼養(yǎng)生長和維持,。其性能與市場*的mTeSR™1或E8相比，在生長速度,、特征形態(tài),、插件標記、正常核型和向不同胚層的分化等方面都有一定的優(yōu)勢,。

PSGro人iPSC/ESC胚胎干細胞無血清培養(yǎng)基

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StemRD     PGroF-500    PSGro-Free®iPSC/ESC Growth Medium    500mL/套

                        人iPSC/ESC胚胎干細胞生長培養(yǎng)基

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內容和存儲

PSGro-Free^®（Cat,。＃PGroF）包含兩個組件：

需要或建議的其他關鍵試劑

1. 細胞外基質蛋白,，例如Matrigel TM（BD,，cat＃354277）或等同物
2. Accutase（Millipore，SCR005）或Collagenase IV（Invitrogen,，17104）或同等物
3. ROCK抑制劑Y-27632（StemRD,，Y-01 / -05 / -25）或Thiazovivin（StemRD，Thia-01 / -05 / -25）

中等準備

1. 在4°C下解凍PSGro-Free^®補充劑,。 如果需要,，可以將解凍的Supplement等分并儲存在-20°C或更低溫度下，但應避免進一步凍融,。
2. 要制備PSGro-Free^®*培養(yǎng)基,，將1份補充劑加入9份基礎培養(yǎng)基中。
3. 如果需要,，可以將抗生素添加到*培養(yǎng)基中,。
4. 一旦制成，PSGro-Free^®*培養(yǎng)基在2至8°C的黑暗中儲存時可穩(wěn)定2周,。

具有細胞外基質蛋白的涂層板,，例如Matrigel TM

請參閱制造商的說明。 對于BD Matrigel™,，可遵循以下程序：

1. 在冰上解凍Matrigel™,。 用預冷的DMEM培養(yǎng)基稀釋基質膠1:50。
2. 立即使用稀釋的Matrigel™溶液涂覆組織培養(yǎng)板,。 對于6孔板,，每孔使用1 mL稀釋的Matrigel™溶液，旋轉平板使溶液均勻涂抹,。
3. 讓板在37℃下放置1小時或在4℃下放置過夜,。

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生長無飼養(yǎng)細胞適應PSGro-Free^®

已經(jīng)在較常用的hiPSC / ESC培養(yǎng)基中生長的人iPSC或ESC可以容易地適應PSGro-Free^®。 用PSGro-Free®進行一輪1：1稀釋的含血清或無血清培養(yǎng)基通常就足夠了,。 然而,，對于某些媒體和細胞系，可能需要更長和更多的研究生適應,。

生長飼養(yǎng)細胞依賴細胞適應PSGro-Free^®

1. 用Accutase,，Collagenase IV或同等物質分離細胞。
2. 添加以前使用的培養(yǎng)基,，輕輕刮去細胞作為聚集體,。 理想的聚集體尺寸與其他介質類似，過度移液的單細胞可能會降低電鍍效率,。
3. 將具有細胞聚集體的懸浮液轉移到15ml管中,。
4. 在室溫下以200×g離心5分鐘,。
5. 丟棄Matrigel™溶液，立即添加PSGro-Free^®（例如,，2 mL /孔用于6孔板）,。
6. 離心后，棄去上清液,，用2mL先前使用的培養(yǎng)基輕輕重懸沉淀,。 注意：向培養(yǎng)基中添加ROCK抑制劑（Y-27632或Thiazovivin）可顯著提高存活率和電鍍效率。
7. 用PSGro-Free®將先前使用的培養(yǎng)基中的細胞聚集體轉移到孔中,。 混合,。 輕輕地。
8. 在37℃,，5％CO 2和95％濕度下培養(yǎng)細胞,。
9. 如果星期五播種細胞，請在周一更換培養(yǎng)基至4 mL PSGro-Free®（周末無需更換）,。 如果細胞在一周中的其他日子播種,，則在第二天更換。

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PSGro-Free^®中冷凍細胞的回收

1. 在37°C水浴中快速解凍hiPSC或hESC,，將內容物轉移至15 mL管中,。 在溫和混合下將10mL先前用于細胞的培養(yǎng)基滴加到管中。
2. 在室溫下以200×g離心細胞5分鐘,。
3. 丟棄Matrigel™溶液,，立即添加PSGro-Free^®（例如，2 mL /孔用于6孔板）,。
4. 離心后，棄去上清液,，用2mL先前使用的培養(yǎng)基輕輕重懸沉淀,。 注意：向培養(yǎng)基中添加ROCK抑制劑（Y-27632或Thiazovivin）可顯著提高存活率和電鍍效率。
5. 用PSGro-Free®將先前使用的培養(yǎng)基中的細胞聚集體轉移到平板上,。 輕輕混合,。
6. 在37℃，5％CO 2和95％濕度下培養(yǎng)細胞,。
7. 第二天將培養(yǎng)基更換為4 mL PSGro-Free®,。

在無飼養(yǎng)細胞條件下傳代PSGro-Free^®中的細胞

1. 在顯微鏡下觀察以識別分化區(qū)域。 使用平板底部的鏡頭標記（例如,，6孔板）標記分化的菌落
2. 通過用移液管*或抽吸刮擦去除分化區(qū)域,。
3. 從細胞培養(yǎng)物中吸出培養(yǎng)基并用PBS沖洗。
4. 每孔加入0.5 mL Accutase或Collagenase IV,。 在室溫下靜置1-2分鐘,。
5. 取出Accutase,，用2 mL PSGro-Free®輕輕沖洗2-3次，以去除殘留的酶,。
6. 加入2 mL /孔PSGro-Free®并用細胞刮刀刮掉菌落,。
7. 將分離的細胞聚集體轉移至15 mL錐形管中，并用另外2 mL PSGro-Free®沖洗孔以收集任何剩余的聚集體,。
8. 在室溫下以200×g離心5分鐘,。
9. 吸出上清液。 通過輕輕移液將沉淀重懸于4 mL PSGro-Free®中,。 注意：向培養(yǎng)基中添加ROCK抑制劑（Y-27632或Thiazovivin）可顯著提高存活率和電鍍效率,。
10. 用PSGro-Free®將細胞聚集體鋪在涂有Matrigel™的新平板上。
11. 在37℃,，5％CO 2和95％濕度下培養(yǎng)細胞,。 每天更換介質。
12. 如果星期五播種細胞,，請在周一更換培養(yǎng)基至4 mL PSGro-Free®（周末無需更換）,。 如果細胞在一周中的其他日子播種，則在第二天更換,。 注意：如果菌落處于*密度,，細胞可以每隔5-7天分裂，使用1：5到1:10的分裂,。

PSGro-Free^®中細胞的低溫保存

1. 準備含有90％PSGro-Free®和10％DMSO的冷凍培養(yǎng)基,。 注意：向培養(yǎng)基中添加ROCK抑制劑（Y-27632或Thiazovivin）可顯著提高存活率和電鍍效率。
2. 在無飼料條件下,，從PSGro-Free^®中傳代細胞進行步驟1-8
3. 輕輕吸出上清液,，注意保持細胞沉淀完整。
4. 輕輕地將沉淀重懸于冷凍培養(yǎng)基中,，注意使細胞聚集體比通常用于傳代的細胞更大,。
5. 將冷凍培養(yǎng)基中的1mL細胞聚集體轉移到每個標記的冷凍管中。
6. 將小瓶置于異丙醇冷凍容器中,，并將容器置于-80℃
7. 第二天轉移到液氮罐中進行長期儲存,。

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提供產(chǎn)品：華雅干細胞致力于為中國干細胞領域的干細胞科學研究、臍帶血/造血干細胞/臍帶/脂肪/胎盤干細胞庫,、干細胞臨床轉化醫(yī)學,、干細胞美容及干細胞抗衰老、免疫細胞治療,、T細胞治療,、臨床干細胞治療等再生醫(yī)學和個體化治療產(chǎn)業(yè)鏈的相關客戶提供：MSC間充質干細胞培養(yǎng)基、iPS/ES胚胎干細胞培養(yǎng)基,、血清替代物,、羊水培養(yǎng)基,、基底膜基質膠細胞支架、干細胞生長分化調控因子,、BioMarker 流式檢測抗體,、支原體檢測試劑盒、內毒素檢測試劑盒,、干細胞存儲細胞凍存袋,、細胞培養(yǎng)瓶、USP級DMSO二甲基亞砜細胞凍存液,、細胞培養(yǎng)相關試劑耗材儀器等種類豐富的產(chǎn)品,，以“Focus on improving the quality of Stem Cells專注干細胞研究，提升干細胞品質”為己任,，我們與客戶攜手為中國干細胞產(chǎn)業(yè)的發(fā)展而前行,。

重慶市華雅干細胞技術有限公司主營：干細胞、細胞凍存,、細胞治療,、試劑耗材 相關板塊的產(chǎn)品,，以“傳遞科學價值,，服務科學研究”為宗旨,，經(jīng)過近五年的努力推廣,，重慶市華雅干細胞技術有限公司在全中國代理的BD科研產(chǎn)品,、OriGen干細胞凍存袋等產(chǎn)品已經(jīng)成功銷往：上海市,、北京市、重慶市,、天津市,、廣東省的廣州市,、深圳市,、珠海市、江西省的南昌市,、四川省的成都市、綿陽,、浙江省的杭州市,、寧波,、溫州、江蘇省的南京市,、蘇州,、無錫,、泰州,、湖南省的長沙、陜西省的西安市,、楊凌、甘肅省的蘭州,、寧夏的銀川,、新疆的烏魯木齊,、廣西的南寧市,、山東省的濟南、青島,、東北三省 遼寧省的沈陽市、大連市,、吉林省的長春市,、黑龍江省的哈爾濱市等中國絕大部分省市和自治區(qū),。

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