目錄:上海華雅思創(chuàng)生物科技有限公司>>科研采血管>>科研采集管>> BD 762165 全血RNA采集管 RNA-seq實驗
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 762165 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
BD 762165 全血RNA采集管 RNA-seq實驗所需試劑耗材,，華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應,，歡迎咨詢
血液是一種信息量巨大,、獲取方便且微創(chuàng)的樣本類型,，廣泛用于診斷和臨床研究,，以探索疾病的病理和生理機制以及療法的作用。全血轉錄組測序是一種基于RNA測序（RNA-Seq）的方法,，可對全血進行深入的基因表達譜分析,，深入了解全系統(tǒng)范圍內(nèi)所有轉錄本的表達和豐度。高通量RNA-Seq技術的發(fā)展使我們能夠以較低的成本收集高質量的血液轉錄組信息,，為發(fā)現(xiàn)生物標志物,、了解藥物反應,、病理和生理過程以及疾病的無創(chuàng)診斷帶來了革命性的變化,。
外周血的優(yōu)勢在于采集快捷，且可在大規(guī)模人群中實現(xiàn),。然而,，一旦血液離開人體,，問題就來了。傳統(tǒng)方法需要從全血中分離白細胞,，再提取RNA,，以解決血液中污染物的問題。如今,，專門為制備血液樣本而開發(fā)的方案使我們能夠從全血中獲得高質量的RNA-Seq 數(shù)據(jù),。
什么是 RNA-Seq ？
RNA-seq即轉錄組測序技術（Transcriptome sequencing）,，廣義的定義為：對細胞內(nèi)所有RNA（包括rRNA/ tRNA/ mRNA等）進行高通量測序,，狹義的定義為：對細胞內(nèi)mRNA進行高通量測序，臨床檢驗實驗室指的一般為狹義的轉錄組測序,。
血液樣本
任何血液轉錄組分析實驗的第一步都是通過靜脈穿刺或指針采血,。從少量血液中獲取優(yōu)質RNA的技術進步，如通過指針采樣,，將使廣泛的研究成為可能,，參與者甚至可以進行自我采樣。
血液RNA降解可能發(fā)生在采集,、儲存和處理過程中,，因此，血液排出體外后,，必須防止或減少RNA降解,。而血液RNA極易降解的原因之一是血漿中含有高濃度的RNA酶（RNase）。在一項研究中,，血漿內(nèi)的游離RNA僅在15 秒鐘就發(fā)生降解,，導致無法進行實時PCR擴增，RNA酶的威力由此可見一斑,。因此,，在采集全血時立即抑制RNA酶的活性至關重要，這樣才能確保采集高質量的RNA,，這對下游測序,、生物標記物鑒定和疾病診斷至關重要。
為了降低RNA的降解,，特別是在開展大規(guī)模血液轉錄組學項目時,，我們建議使用專門RNA采xue管收集血液，如PAXgene?全血RNA 采xue管（BD, 762165）,。該采xue管含有能穩(wěn)定 RNA 的專有試劑,，能產(chǎn)生準確反映采樣時血液狀態(tài)的基因表達數(shù)據(jù)。
更重要的一點，采xue管的樣本儲藏時間及RNA質量的穩(wěn)定性,，是大型多中心臨床研究的一個關鍵考慮因素,。PAXgene全血RNA保存管（762165）內(nèi)含能夠穩(wěn)定體內(nèi)基因轉錄性狀的抗凝劑?？鼓齽┠軌驕p少RNA在體外的降解,，穩(wěn)定細胞內(nèi)的RNA，并將基因誘導的水平降低到最小程度,，被廣泛用于血液RNA樣本的保存,。相關實驗證明，PAXgene? 全血RNA 采xue管中樣本在-80℃儲存7年后 ,，提取的RNA 質量與產(chǎn)量均較穩(wěn)定,，樣本在-20℃中儲存11年后，RNA 質量與采集當天相比沒有降低,。
RNA-seq
PAXgene? 血液RNA管附帶有配套的RNA提取方案（Qiagen,，cat.762331），也可以使用不同的RNA提取方案進行分離,，例如使用苯·酚/氯仿提取,，或與血液樣本兼容的其他方案。
細胞壁被破壞后,，裂解液中不僅含有RNA,，還含有DNA和蛋白質?；蚪MDNA（gDNA）是"雜質"之一,，會在數(shù)據(jù)分析步驟中造成偏差和定量問題。然而,，由于血細胞中DNA的含量高于RNA,，一般會對從血液中分離出來的RNA使用DNase進行處理。
在開始制備RNA-Seq文庫之前,，是否需要進行任何RNA 預處理在很大程度上取決于實驗設計,、所選文庫預處理和樣本類型。在從血液中分離出的RNA樣本中,，有兩個重要的"雜質"占據(jù)了很大的測序空間,，它們是珠蛋白mRNA和核糖體RNA（rRNA）。
紅細胞中的珠蛋白mRNA量可占樣本中所有mRNA的 30-80%,，而rRNA 則占總RNA的80-90 %,。在mRNA-Seq實驗中，經(jīng)過poly(A)選擇后,，這些轉錄本會消耗很大比例的測序讀數(shù),。此外,，它們還影響了對血液轉錄譜的分析。
另外,，如下圖所示,，在沒有珠蛋白耗竭的情況下,，基因檢測率會降低,。從血液中分離的RNA樣本中去除rRNA及珠蛋白mRNA，可釋放出更多寶貴的測序空間,，并將測序讀數(shù)集中到最重要的部分,。
全血是一種珍貴、易得的樣本類型,，也是制備血液RNA-Seq的樣本,。不同的實驗設計和RNA-Seq類型，從全血中獲取高質量RNA-Seq數(shù)據(jù)的步驟會有所不同,。無論選擇哪種方法,，優(yōu)良實踐建議都是在采樣后立即滅活RNase以防止RNA降解；用DNase處理RNA樣品以去除gDNA,，去除球蛋白mRNA以提高基因檢測率,，如果是mRNA-Seq或總RNA-Seq，則同時去除rRNA,，以釋放額外的測序空間,。
實驗小貼士：少走彎路更高效嚴格操作規(guī)范：RNA-seq實驗中稍有不慎便會影響結果，請確保每一步均符合標準操作規(guī)程,。批量處理樣本：為減少批次間誤差,，建議一次性處理多個樣本，統(tǒng)一條件操作,。數(shù)據(jù)備份：測序數(shù)據(jù)是寶貴資產(chǎn),，請及時備份以防丟失。
產(chǎn)品推薦：提升實驗效率的必·備選擇
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血液RNA-seq實驗盡管復雜,，但通過合理的試劑選擇、優(yōu)化的實驗流程以及科學的數(shù)據(jù)分析,，您一定能獲得高質量的研究成果,！想了解更多實驗方案或購買相關試劑，請聯(lián)系【華雅思創(chuàng)生物】,，我們致力于為科研工作者提供優(yōu)質產(chǎn)品與技術支持,！
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