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羊水細(xì)胞培養(yǎng)原文鏈接：http://www.stemcell.so/article-1041.html

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干細(xì)胞搜網(wǎng)實驗室人員教您如何做好羊水細(xì)胞培養(yǎng)：

羊水中含有胎兒脫落的上皮細(xì)胞,，可在體外培養(yǎng)用以分析胎兒染色體核型,。目前國內(nèi) 外大都采用腹腔羊膜穿刺術(shù)，妊娠12-30周的羊水細(xì)胞均可培養(yǎng)成功,。羊膜腔穿刺取羊水行染色體分析,，*孕周為16周左右。因此時羊水增長快,，羊水中細(xì) 胞較多，細(xì)胞培養(yǎng)易于生長,，而且不易損傷胎兒,。國內(nèi)多數(shù)選擇的穿刺時間在妊娠的第16-30周。國外現(xiàn)已較多地采用妊娠早期的羊膜穿刺,，但需在B超下定位 及穿刺,。羊水量按妊娠時間大致計算（1ml/w）,。資料表明，穿刺病例的妊娠結(jié)局,、分娩方式,、胎兒的出生體重等與未穿刺無明顯差異。

　　1,、實驗材料
　　2,5%碘酒,、75%酒精、無菌棉簽和棉球,、鑷子,、20-22號無菌腰穿針、吸管,、培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)液（PRMI 1640、199,、F10,、F12）、小牛血清,、秋水仙素,、KCL、甲醇,、冰醋酸,、培養(yǎng)皿、蓋玻片等,。
　　2,、培養(yǎng)液配制
　　F-12 85%
　　小牛血清 15%
　　雙抗 100u/ml
　　小瓶貯藏 4-8℃
　　3、操作過程

　　A（蓋玻片培養(yǎng)法）

　?。?）采樣：選擇妊娠13-14周婦女,，在無菌條件下抽取羊水5ml，立即注入無菌離心管中,；（2）收集：離心分離細(xì)胞,，1000rpm10分鐘，去 上清,，留0.5ml,，輕打混勻；（3）接種：30mm培養(yǎng)皿中放蓋玻片1張,，每片滴混勻的細(xì)胞液1-2滴,，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)30-60分鐘；（4）培養(yǎng)：取 出后從蓋玻片外加培養(yǎng)液2ml,，靜置培養(yǎng)48小時后觀察細(xì)胞生殖狀況并定時換液,，5-10天后,，可見大量成纖維細(xì)胞或上皮樣細(xì)胞生長；（5）終止培養(yǎng)：當(dāng) 有大量圓形發(fā)亮細(xì)胞出現(xiàn)時,，加秋水仙素0.02-0.04ug/ml,，作用10-12小時；（6）低滲：倒掉培養(yǎng)液,，加預(yù)溫37℃0.075MKCL溶液 5ml,，37℃溫育30分鐘，鏡下可見脹大的羊水細(xì)胞,，加0.5-1ml 3∶1甲醇：冰醋酸固定液預(yù)固定,；（7）固定：倒掉低滲液，加5ml固定液固定30分鐘以上,，反復(fù)3次,；（8）干燥：將附有細(xì)胞的蓋玻片斜放于培養(yǎng)皿中， 置80℃烤箱處理2-3小時,；（9）膠片：將附有細(xì)胞的蓋玻片用樹脂膠封固于玻片上,，正面朝外，小心細(xì)胞破壞,；

　　B（常規(guī)培養(yǎng)法）

　?。?）—（2）相同于蓋玻片培養(yǎng)法；（3）接種：將混勻的羊水細(xì)胞種置于50ml或100ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi),，平均10ml羊水細(xì)胞收集的細(xì)胞種置一瓶 加5-10ml混合培養(yǎng)液,。（4）培養(yǎng)：酒精燈火先封口，靜置培養(yǎng)48小時后觀察細(xì)胞貼臂及生長情況,，5-10天后可見瓶底面有大量羊水細(xì)胞生長,；（5） 終止培養(yǎng)：同A法；（6）細(xì)胞收集：將培養(yǎng)液倒入一干凈離心管中,，加0.025%的胰蛋白酶0.5-1ml/瓶,，輕輕搖動，使培養(yǎng)瓶底面*接觸消化酶,， 然后用彎頭吸管吹打,，待細(xì)胞全部脫落后加前培養(yǎng)液終止胰蛋白酶消化。用吸管移細(xì)胞懸液于離心管中,。1000-2000rpm10分鐘,，棄上清，留細(xì)胞沉 慮,。若一次消化不*,，可反復(fù)消化；（7）低滲及預(yù)固定：加預(yù)溫37℃KCL溶液10ml,，37℃溫育30分鐘,，加0.5-1ml新鮮配制的3∶1甲醇冰 乙酸固定液預(yù)固定，用氣泡吹打細(xì)胞使其混勻,。（8）固定：用新鮮配制的3∶2甲冰固定三次,，每次30分鐘。固定液加入時沿管壁緩慢加入,；（9）制片及干 燥：用絨毛制片,；
（10）分帶處理。