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干細胞搜網(wǎng)實驗室人員教您如何做好羊水細胞培養(yǎng)：
羊水中含有胎兒脫落的上皮細胞,，可在體外培養(yǎng)用以分析胎兒染色體核型。目前國內(nèi) 外大都采用腹腔羊膜穿刺術(shù),，妊娠12-30周的羊水細胞均可培養(yǎng)成功,。羊膜腔穿刺取羊水行染色體分析，*孕周為16周左右,。因此時羊水增長快,，羊水中細 胞較多，細胞培養(yǎng)易于生長,，而且不易損傷胎兒,。國內(nèi)多數(shù)選擇的穿刺時間在妊娠的第16-30周。國外現(xiàn)已較多地采用妊娠早期的羊膜穿刺,，但需在B超下定位 及穿刺,。羊水量按妊娠時間大致計算（1ml/w）。資料表明,，穿刺病例的妊娠結(jié)局,、分娩方式、胎兒的出生體重等與未穿刺無明顯差異,。
1,、實驗材料
2,5%碘酒、75%酒精,、無菌棉簽和棉球,、鑷子、20-22號無菌腰穿針,、吸管,、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)液（PRMI 1640,、199,、F10、F12）,、小牛血清,、秋水仙素、KCL,、甲醇,、冰醋酸、培養(yǎng)皿,、蓋玻片等,。
2,、培養(yǎng)液配制
F-12 85%
小牛血清 15%
雙抗 100u/ml
小瓶貯藏 4-8℃
3、操作過程
A（蓋玻片培養(yǎng)法）
?。?）采樣：選擇妊娠13-14周婦女,，在無菌條件下抽取羊水5ml，立即注入無菌離心管中,；（2）收集：離心分離細胞,，1000rpm10分鐘，去 上清,，留0.5ml，輕打混勻,；（3）接種：30mm培養(yǎng)皿中放蓋玻片1張,，每片滴混勻的細胞液1-2滴，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)30-60分鐘,；（4）培養(yǎng)：取 出后從蓋玻片外加培養(yǎng)液2ml,，靜置培養(yǎng)48小時后觀察細胞生殖狀況并定時換液，5-10天后,，可見大量成纖維細胞或上皮樣細胞生長,；（5）終止培養(yǎng)：當 有大量圓形發(fā)亮細胞出現(xiàn)時，加秋水仙素0.02-0.04ug/ml,，作用10-12小時,；（6）低滲：倒掉培養(yǎng)液，加預(yù)溫37℃0.075MKCL溶液 5ml,，37℃溫育30分鐘,，鏡下可見脹大的羊水細胞，加0.5-1ml 3∶1甲醇：冰醋酸固定液預(yù)固定,；（7）固定：倒掉低滲液,，加5ml固定液固定30分鐘以上，反復(fù)3次,；（8）干燥：將附有細胞的蓋玻片斜放于培養(yǎng)皿中,， 置80℃烤箱處理2-3小時；（9）膠片：將附有細胞的蓋玻片用樹脂膠封固于玻片上,，正面朝外,，小心細胞破壞；
B（常規(guī)培養(yǎng)法）
?。?）—（2）相同于蓋玻片培養(yǎng)法,；（3）接種：將混勻的羊水細胞種置于50ml或100ml細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)，平均10ml羊水細胞收集的細胞種置一瓶 加5-10ml混合培養(yǎng)液,。（4）培養(yǎng)：酒精燈火先封口,，靜置培養(yǎng)48小時后觀察細胞貼臂及生長情況，5-10天后可見瓶底面有大量羊水細胞生長；（5） 終止培養(yǎng)：同A法,；（6）細胞收集：將培養(yǎng)液倒入一干凈離心管中,，加0.025%的胰蛋白酶0.5-1ml/瓶，輕輕搖動,，使培養(yǎng)瓶底面*接觸消化酶,， 然后用彎頭吸管吹打，待細胞全部脫落后加前培養(yǎng)液終止胰蛋白酶消化,。用吸管移細胞懸液于離心管中,。1000-2000rpm10分鐘，棄上清,，留細胞沉 慮,。若一次消化不*，可反復(fù)消化,；（7）低滲及預(yù)固定：加預(yù)溫37℃KCL溶液10ml,，37℃溫育30分鐘，加0.5-1ml新鮮配制的3∶1甲醇冰 乙酸固定液預(yù)固定,，用氣泡吹打細胞使其混勻,。（8）固定：用新鮮配制的3∶2甲冰固定三次，每次30分鐘,。固定液加入時沿管壁緩慢加入,；（9）制片及干 燥：用絨毛制片；
（10）分帶處理,。
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