間充質干細胞無血清培養(yǎng)基是 為擴增從骨髓,、臍帶血或脂肪組織提取的人類間充質干細胞（human mesenchymalstem cells, hMSC）而設計的無血清培養(yǎng)基,。該人間充質干細胞培養(yǎng)基化學成分明確，所有組分為化學合成或重組純化的蛋白,，并且無異源蛋白,，不含直接從任何動物組織提取成份。因此它不存在批間誤差和潛在的動物源性病原體,。如果配合使用特定的培養(yǎng)板（見下）,，還可以省去鋪板的工序和時間，免去鋪板膠的費用,。
一 人間充質干細胞培養(yǎng)基配制：
1. 2‐8℃解凍添加物,。
2. 無菌條件下配制100ml間充質干細胞無血清*培養(yǎng)基。
3.如果需要也可加入抗菌素（自選）,。
配制好的間充質干細胞無血清*培養(yǎng)液（包含基礎培養(yǎng)基,、添加物、谷氨酸鹽）2-8℃ 避光保存,，保存期1 個月,。
二 培養(yǎng)基的使用：
培養(yǎng)于其它無血清或有血清培養(yǎng)基的MSCs 可以快捷方便地轉換到本品中培養(yǎng)。多數情況下,，生長狀態(tài)良好的MSCs直接換液為本品即可,。個別情況下，可能需要逐步轉換,，如按20%,，40%,，60%，80%,，100%依次遞增,，至zui終*使用本品。
三 StemRD hMSCs細胞的復蘇：
1.37℃水浴快速復蘇凍融細胞,。
2.將細胞轉移到無菌50ml離心管中,。
3.逐滴向裝有1ml細胞液的離心管中加入10ml預先復溫的間充質干細胞無血清*培養(yǎng)基，注意邊加邊輕輕晃動離心管,。
4.將上述混合溶液轉移到細胞培養(yǎng)瓶或細胞培養(yǎng)板中,。
5.在5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。
6.培養(yǎng)24h,，換液。
7.此后每隔2天換液,，直到傳代培養(yǎng)。
四 StemRD人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)：
如果使用特定的細胞培養(yǎng)板,，如BD PrimariaTM 系列產品或Corning CellBINDTM 系列產品,，那么使用本產品培養(yǎng)間充質干細胞是不需要預先鋪板。傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板是否無需鋪板正在評估中,。對于那些還沒有被評估的產品或不適用于不預先鋪板工序的產品,，推薦使用人纖維連接蛋白（Fibronectin）進行鋪板。
1.在鏡下觀察（使用本產品或其它培養(yǎng)基）細胞,，確定傳代的時間,，推薦在細胞量達到70%滿的時候傳代，不要讓細胞超過80%滿,！
2.預先將0.05%胰酶/0.53mM EDTA和間充質干細胞無血清*培養(yǎng)基復溫到37℃待用,。
3.用移液槍吸走舊培養(yǎng)基。
4.用DPBS洗一遍（自選）,。
5.加入0.05%胰酶/0.53mM EDTA液以覆蓋住細胞表面,，推薦室溫消化細胞（消化液用量：6孔板每孔約10cm2加入0.5ml，25cm2培養(yǎng)板加入1ml）,。
6. 鏡下觀察細胞,，當看見細胞開始從培養(yǎng)板底脫離，輕輕敲擊培養(yǎng)板邊緣幫助細胞脫落,。消化時間為1‐3分鐘,。
7. 加入2倍于消化液體積的間充質干細胞無血清*培養(yǎng)基，將細胞懸液收集于15ml離心管中,。
8.1200rpm離心10分鐘,。
9.盡量棄去離心后的上層清液,。用間充質干細胞無血清*培養(yǎng)基重懸細胞。此時可取細胞懸液進行細胞計數,。
10.按照3-5X103/cm2密度接種細胞,。
11.5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
12.每隔2天換新鮮的間充質干細胞無血清*培養(yǎng)基,。
13.當細胞生長達到70%滿時，傳代（一般每隔3-4天）,。
五 凍存細胞：
1.配制細胞凍存液,。
2.離心分離細胞，用凍存液重懸細胞,。
3.將凍存管轉移到凍存盒中,，置于-80℃冰箱。
4.將細胞轉移到液氮罐中長期貯存,。
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