01. 貼壁VS懸浮轉(zhuǎn)染區(qū)別
貼壁轉(zhuǎn)染與懸浮轉(zhuǎn)染在操作流程,、時(shí)間成本,、轉(zhuǎn)染效率、操作難度,、細(xì)胞用量,、觀察難度和適用場(chǎng)景上有所區(qū)別。貼壁轉(zhuǎn)染通常需要較長(zhǎng)時(shí)間等待細(xì)胞貼壁,，但操作簡(jiǎn)單,，轉(zhuǎn)染效率高，適合常規(guī)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)和需要高效率轉(zhuǎn)染的場(chǎng)景,。懸浮轉(zhuǎn)染則時(shí)間成本較短,，細(xì)胞用量更靈活，適合快速篩選實(shí)驗(yàn)和大規(guī)模轉(zhuǎn)染,。
02. 細(xì)胞培養(yǎng)與準(zhǔn)備
以LX2細(xì)胞為例,，這是一種人類肝星狀細(xì)胞的永生化細(xì)胞系，廣泛用于肝臟研究,。LX2細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),，呈上皮細(xì)胞樣。培養(yǎng)基成分為DMEM培養(yǎng)基,，含10%胎牛血清和1%雙抗,。轉(zhuǎn)染前，確保細(xì)胞處于良好生長(zhǎng)狀態(tài),，活率需超過(guò)90%,。調(diào)整細(xì)胞轉(zhuǎn)染密度時(shí)，避免反復(fù)離心,，以免影響細(xì)胞活力和轉(zhuǎn)染效率,。
03. 轉(zhuǎn)染操作
3.1 細(xì)胞準(zhǔn)備
提前一天種板，準(zhǔn)備貼壁細(xì)胞,。
在96孔板中加入約2.5×10^4細(xì)胞,，細(xì)胞過(guò)夜貼壁,。
待細(xì)胞匯合度為70%-80%時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，用Opti-MEM輕柔清洗細(xì)胞兩次,，并加入20 μL Opti-MEM備用。
3.2 配置ProteanFect轉(zhuǎn)染體系
在40 μL Reagent A中加入0.5 μg EGFP mRNA,，充分混勻,。
往上述混合物中加入1.4 μL Reagent B混勻。
3.3 轉(zhuǎn)染
將上述ProteanFect轉(zhuǎn)染液加入細(xì)胞,。
37℃培養(yǎng)箱孵育60分鐘,。
棄轉(zhuǎn)染液（為避免細(xì)胞損失，無(wú)需完·全棄盡）,。
加入200 μL完·全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),，24小時(shí)后檢測(cè)EGFP mRNA表達(dá)，48小時(shí)后檢測(cè)GFP pDNA表達(dá),。
04. 轉(zhuǎn)染檢測(cè)
使用ProteanFect試劑盒轉(zhuǎn)染LX2細(xì)胞后,，可以通過(guò)熒光顯微鏡觀察EGFP的表達(dá)，評(píng)估轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞形態(tài),。細(xì)胞活率可通過(guò)鏡下觀察,、臺(tái)盼藍(lán)染色或流式細(xì)胞術(shù)等方法檢測(cè)。
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