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實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1. 材料與試劑：新鮮小鼠脾臟,、PBS緩沖液,、無菌手術(shù)器械（剪刀、鑷子等）,、細(xì)胞過濾器,、CD4/CD8磁珠分選試劑（如需純化特定亞型），或陰選的方式去除B細(xì)胞,、單核細(xì)胞,、NK細(xì)胞的磁珠分選試劑，RPMI-1640培養(yǎng)基,，人白介素2,，胎牛血清，抗生素（如青霉素-鏈霉素）,。
2. 設(shè)備：無菌操作臺,、離心機(jī)、磁力分選架,。

從小鼠脾臟獲取單細(xì)胞懸液

1. 小鼠頸椎脫臼處死,，75%乙醇浸泡5分鐘，取出小鼠置于無菌操作臺上,，左腹側(cè)朝上,。
2. 在小鼠左腹側(cè)中部剪開小口，撕開皮膚暴露腹壁,，可見紅色長條狀脾臟,。
3. 在脾臟下側(cè)提起腹膜，剪開后上翻,，暴露脾臟,，用鑷子提起脾臟，眼科剪分離下面的結(jié)締組織,，取出脾臟,，剝?nèi)ブ車慕Y(jié)締組織，期間用含有2%FBS的PBS溶液保持脾臟濕潤,。
4. 將脾臟放于70UM過濾網(wǎng)中,，用注射器針芯輕輕研壓脾臟，用含2%FBS的PBS沖洗過濾網(wǎng),，獲細(xì)胞懸液,。
5. 300G離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀,，然后加入紅細(xì)胞裂解液裂解,，將紅細(xì)胞充分裂解，收集白細(xì)胞,。

從單細(xì)胞懸液中分離小鼠原代T細(xì)胞

1. 全T細(xì)胞分離：利用陰選的方式去除B細(xì)胞,、單核細(xì)胞、NK細(xì)胞等，按照分選試劑盒的說明書進(jìn)行,。
2. 亞群分離（如需要CD4+或CD8+ T細(xì)胞）：
• 使用CD4或CD8磁珠（如MACS磁珠）分選獲得特定T細(xì)胞亞群,。
• 將磁珠標(biāo)記的細(xì)胞懸液置于磁性分選裝置中，分離出目標(biāo)T細(xì)胞亞群,。

培養(yǎng)與檢測

1. 將分離的T細(xì)胞重懸于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中,，并加入抗生素與人白介素2,。
2. 細(xì)胞密度一般控制在1-2×10^6 CELLS/ML，放入37°C,、5% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),。

轉(zhuǎn)染

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