轉(zhuǎn)染試劑是一種新結(jié)構(gòu)類型的DNA轉(zhuǎn)染試劑。該轉(zhuǎn)染試劑為陽離子聚合物和脂質(zhì)體的雜合體,,具有轉(zhuǎn)染效率高,、重復性好、毒性低和穩(wěn)定性的特點,,目前該轉(zhuǎn)染試劑為我公司產(chǎn)品,。轉(zhuǎn)染試劑用于哺乳動物細胞的轉(zhuǎn)染,如腫瘤細胞系(常見的細胞有HEK293,CHO,COS-1,COS-7,Hela,NIH3T3等)和原代培養(yǎng)的細胞以及昆蟲細胞sf9,sf21等,。轉(zhuǎn)染試劑,,1.0ml,可用于24孔板轉(zhuǎn)染333次或者6孔板166次轉(zhuǎn)染操作,。
轉(zhuǎn)染試劑的使用方法:
1,、接種細胞:
對于貼壁細胞,轉(zhuǎn)染前18-24 h進行鋪板(不含抗生素),,使其在轉(zhuǎn)染時的密度大約在80%左右,。對于懸浮細胞,轉(zhuǎn)染當天,,配制EZ Trans-DNA復合物之前進行鋪板,每500 ?L生長培養(yǎng)基中加入4~8×105cells,。
2,、準備EZ Trans-DNA復合物:
a、對于每孔細胞,,將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(或者OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基),,混勻。
b,、對于每孔細胞,,將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(或者OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基),輕輕混勻,。
注:無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液,,不能使用含血清的培養(yǎng)基進行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復合物的形成過程不能含有血清,。
c,、將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中,,輕輕混勻。
d,、室溫放置10-15 min,,以形成EZ Trans-DNA復合物。
3,、轉(zhuǎn)染細胞:
a,、將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復合物均勻滴入到含細胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微振蕩,,讓EZ Trans-DNA復合物分散均勻,。
b、在37℃,,5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h,,去除含EZ Trans-DNA復合物的培養(yǎng)液,更換新的培養(yǎng)液,,繼續(xù)培養(yǎng)至對轉(zhuǎn)入基因表達分析,。
以上就是轉(zhuǎn)染試劑的相關(guān)知識點,希望以上的內(nèi)容能夠?qū)Υ蠹矣兴鶐椭?,感謝您的觀看和支持,,后期會整理更多資訊給大家,敬請關(guān)注我們的網(wǎng)站更新,。
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