ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,,得到科研工作者的認(rèn)可及推崇,,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展,。在ELISA試劑盒實驗操作中,,誤差分有系統(tǒng)誤差、偶然誤差,、過失誤差,,而一個小小的誤差主意能夠影響到實驗,很多人往往因為一個小細節(jié),,一個誤差沒能讓實驗成功,。那么實驗誤差概率如何縮小,?除了需要細心之外,,還有一些需要重點注意的地方。今天教您如何才能減少ELISA誤差:
1:檢驗技師應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗,。能熟練操作實驗儀器,、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,,對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決,。
2:使用校對過的微量移液器,排除自然誤差,。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要,。
3:仔細閱讀說明書,嚴(yán)格按照說明書要求進行規(guī)范化操作,。不同批號的試劑不可混用,。值得改進的地方,反復(fù)試驗確定成立后才能改進,。
4:洗滌*,,如若洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性,。洗滌液要新鮮,,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,,也可能出現(xiàn)假陽性,。
5:嚴(yán)控反應(yīng)時間,反應(yīng)時間過長,,酶失活,;反應(yīng)時間過短,,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,,容易洗掉,都可能造成假陰性,。
6:注意試劑盒保存期,,過保存期的試劑不能使用。
7:評估試劑的實用性,,試劑的穩(wěn)定與否,,對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,,應(yīng)進行陰,、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用,。
8:嚴(yán)格掌握顯色時間,,顯色時間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,,底物結(jié)合物的量過少,,易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色,,應(yīng)判為假陽性,,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,,不可報陽性,,這可能是本底顯色的結(jié)果。
9:加樣要準(zhǔn)確,、快速,。如果加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定,,直接影響顯色結(jié)果,。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重,。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗,,如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,,而且試劑長時間暴露在外,,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效,。
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