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今天為大家介紹G-Biosciences Spin-OUT離心式脫鹽柱的使用方法：

以G-Biosciences離心式脫鹽柱Spin-OUT GT-1200 Medi為例：

      G-Biosciences Spin-OUT GT-1200,，與Pharmacia的Sephadex G-50的功能類似,，都是用來代替比較耗時的傳統(tǒng)透析處理，以達(dá)到快速純化蛋白/替換蛋白質(zhì)緩沖液的目的,，不過前者是離心式的,，后者是重力式的。GT-1200適宜于純化分子量大于12,，000的蛋白質(zhì),，有兩種上樣量規(guī)格的：Micro和Medi。沒有現(xiàn)成的使用說明材料,，聽朋友介紹這是非常不錯的品牌,，在國外很火。感興趣之余啃下其英文說明書了,，先了解下其使用步驟：

一,、使用前準(zhǔn)備：

     1.上下顛倒數(shù)次，將管中的凝膠懸浮起來,，然后100×g離心1min,，讓膠體回到管底。這里有兩點(diǎn)需要注意的：1）新的柱子看過去幾乎是透明的,，不要認(rèn)為什么填料都沒有，其實(shí)是顆粒太細(xì)了,；2）離心力是×g,，在離心機(jī)上顯示的是RCF這個單位，而不是RPM,。這兩個單位有本質(zhì)區(qū)別,，需要特別留意。其中：

     RPM(revolution per minute)為離心機(jī)每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)(單位:周/分鐘),；RCF(relative centrifugal force)為相對離心力,，以地心引力即重力加速度的倍數(shù)來表示，一般用×g表示,。 兩者轉(zhuǎn)換關(guān)系如下： RCF=0.0011×r×RPM^2 RPM=(909×RCF÷r)^0.5 r為離心機(jī)轉(zhuǎn)子半徑(單位:米),。

      2.拔掉兩頭的塞子，將柱子放在10ml離心管中,，1,000×g離心2min以移除儲存buffer,。離心完成后，即可看見白色的填充料,。

二,、開始使用（交換buffer）

1. 用緩沖液平衡柱子：加入1-2ml緩沖液,，將柱子放到10ml離心管中，靜置數(shù)分鐘讓緩沖液全部進(jìn)入柱體后,，再重復(fù)加入3-5次,。最后以1,000×g離心2min，棄掉收集到的溶液,，以保證buffer被全部替換了,。

2. 將柱子放到新的離心管中，緩慢加入蛋白質(zhì)樣品,。注意,，上樣量為Medi的柱子最多加入0.5ml樣品，上樣量為Micro的柱子最多加入0.1ml樣品,。樣品加在柱子中間的凝膠上,，而不要碰到樹脂部件。加樣結(jié)束后靜置1-2min,，讓凝膠充分將樣品吸收,。

3. 將柱子放到一個新的離心管中，1,000×g離心4min,，即可獲得純化好樣品了,。

三、柱子的再生

1. 柱子可以重復(fù)利用,。

2. 需要用到2×蛋白質(zhì)洗脫buffer,，用量是每1ml填料使用1ml buffer。

3. 加入洗脫buffer后靜置5min,。

4. 再用5倍填料體積的去離子水沖洗柱子,。

5. 最后用30% 的乙醇保存在4℃條件下。

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