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　　細(xì)胞培養(yǎng)基的5個基本要求：

　　體外培養(yǎng)的細(xì)胞直接生活在培養(yǎng)基中，因此培養(yǎng)基應(yīng)能滿足細(xì)胞對營養(yǎng)成分,、促生長因子,、激素、滲透壓,、pH等諸多方面的要求,。

　　1、營養(yǎng)成分,。

　　維持細(xì)胞生長的營養(yǎng)條件一般包括以下幾個方面：

　　1）氨基酸：是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的原料,。所有細(xì)胞都需要12種必須氨基酸：纈氨酸、亮,、異亮,、蘇、賴,、色、苯丙,、蛋,、組、酪,、精氨酸,、胱氨酸。此外還需要谷氨酰胺,，它在細(xì)胞代謝過程中有重要作用,，所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源，同樣也是合成三,、二,、一磷酸酰苷所需要的基本物質(zhì)。

　　體外培養(yǎng)的各種培養(yǎng)基內(nèi)都含有必需氨基酸,。

　　2）單糖：培養(yǎng)中的細(xì)胞可以進行有氧與無氧酵解,，六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸,、脂肪,、核酸的原料。細(xì)胞對葡萄糖的吸收能力,，半乳糖,。

　　體外培養(yǎng)動物細(xì)胞時，幾乎所有的培養(yǎng)基或培養(yǎng)液中都以葡萄糖作為必含的能源物質(zhì)。

　　3）維生素：主要扮演輔酶,、輔基的角色,，*。生物素,、葉酸,、煙酰胺、泛酸,、吡哆醇,、核黃素、硫胺素,、維生素B12都是培養(yǎng)基常有的成分,。

　　4）無機離子與微量元素：細(xì)胞生長除需要鈉、鉀,、鈣,、鎂、氮和磷等基本元素,，還需要微量元素,，如鐵、鋅,、硒,、銅、錳,、鉬,、釩等。

　　2,、促生長因子及激素,。

　　各種激素、生長因子對于維持細(xì)胞的功能,、保持細(xì)胞的狀態(tài)（分化或未分化）具有十分重要的作用,。有些激素對許多細(xì)胞生長有促生長作用，如胰島素,，它能促進細(xì)胞利用葡萄糖和氨基酸,。有些激素對某一類細(xì)胞有明顯促進作用，如可促進表皮細(xì)胞的生長,，泌乳素有促進乳腺上皮細(xì)胞生長作用等,。

　　3、滲透壓,。

　　細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中,，大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對滲透壓有一定耐受性,。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養(yǎng)人體細(xì)胞的理想滲透壓。鼠細(xì)胞滲透壓在320mOsm/kg左右,。對于大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞,，滲透壓在260－320mOsm/kg的范圍都適宜。

　　4,、無毒,、無污染。

　　體外生長的細(xì)胞對微生物及一些有害有毒物質(zhì)沒有抵抗能力,，因此培養(yǎng)基應(yīng)達(dá)到無化學(xué)物質(zhì)污染,、無微生物污染（如細(xì)菌、真菌,、支原體,、病毒等）、無其他對細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質(zhì)污染（如抗體,、補體）,。對于天然培養(yǎng)基，污染主要來源于取材過程及生物材料本身,，應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格選材,，嚴(yán)格操作。對于合成培養(yǎng)基,，污染主要來源于配制過程,，配制所用的水，器皿應(yīng)十分潔凈,，配制后應(yīng)嚴(yán)格過濾除菌。

　　5,、pH,。

　　氣體也是細(xì)胞生存的必需條件之一，所需氣體豐要是氧和二氧化碳,。氧參與三羧酸循環(huán),，產(chǎn)生能量供給細(xì)胞生長、增殖和合成各種成分,。一些細(xì)胞在缺氧情況下,，借糖酵解也可獲取能量，但多數(shù)細(xì)胞缺氧不能生存,。在開放培養(yǎng)時,，一般置細(xì)胞于95％空氣加5％二氧化碳的混合氣體環(huán)境中培養(yǎng)。二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物,，也是細(xì)胞所需成分,，它主要與維持培養(yǎng)基的pH有直接關(guān)系,。動物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件，pH值約在7．2~7．4℃在細(xì)胞生長過程中,，隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動的加強,，二氧化碳不斷被釋放，培養(yǎng)液變酸,，PH值發(fā)生變化,。由于NaHCO3容易分解為二氧化碳，很不穩(wěn)定,，致使緩沖系統(tǒng)難以地控制,。故這一緩沖系統(tǒng)適合密閉培養(yǎng)。HEPES結(jié)合碳酸氫鈉使用,，可提供更有效的緩沖體系,，主要是防止pH值迅速變動，但大缺點是在開放培養(yǎng)或觀察時難以維持正常的pH值,。造成pH波動主要是代謝產(chǎn)生的CO2,，在封閉式培養(yǎng)過程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸，培養(yǎng)基pH很快下降,。為解決這一問題,，合成培養(yǎng)基中使用了NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng)，并采用開放培養(yǎng),，使細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2及時溢出培養(yǎng)瓶,，再通過穩(wěn)定調(diào)節(jié)溫箱中CO2濃度（5％），與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài),。