英文名稱： MTT
中文名稱： 噻唑蘭
MF： C18H16BrN5S
MW： 414.32
CAS： 298-93-1
1g 5g 10g 量大優(yōu)惠

實(shí)驗(yàn)方法明確問題
⒈選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。一般情況下,，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細(xì)胞長(zhǎng)滿時(shí)約有105個(gè)細(xì)胞,。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此,，在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前,，要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長(zhǎng)曲線,，確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間,，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過滿。這樣,，才能保證MTT結(jié)晶形成酌量與細(xì)胞數(shù)呈的線性關(guān)系,。否則細(xì)胞數(shù)太多敏感性降低，太少觀察不到差異,。
⒉藥物濃度的設(shè)定,。一定要多看文獻(xiàn)，參考別人的結(jié)果再定個(gè)比較大的范圍先初篩,。根據(jù)自己初篩的結(jié)果縮小濃度和時(shí)間范圍再細(xì)篩,。切記！否則,，可能你用的時(shí)間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時(shí)間,。
⒊ 時(shí)間點(diǎn)的設(shè)定。在不同時(shí)間點(diǎn)的測(cè)定OD值,，輸入excel表,，zui后得到不同時(shí)間點(diǎn)的抑制率變化情況，畫出變化的曲線,，曲線什么時(shí)候變得平坦了（到了平臺(tái)期）那個(gè)時(shí)間點(diǎn)應(yīng)該就是的時(shí)間點(diǎn)（因?yàn)檫@個(gè)時(shí)候的細(xì)胞增殖抑制表現(xiàn)的zui明顯）,。
⒋培養(yǎng)時(shí)間。200ul的培養(yǎng)液對(duì)于10的4～5次方的增殖期細(xì)胞來說,，很難維持68h,，如果營(yíng)養(yǎng)不夠的話，細(xì)胞會(huì)由增殖期漸漸趨向G0期而趨于靜止,，影響結(jié)果,，我們是在48h換液的。
⒌MTT法只能測(cè)定細(xì)胞相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力,，不能測(cè)定細(xì)胞數(shù),。做MTT時(shí)，盡量無菌操作,，因?yàn)榧?xì)菌也可以導(dǎo)致MTT比色OD值的升高,。
⒍理論未必都是對(duì)的。要根據(jù)自己的實(shí)際情況調(diào)整。
⒎實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)設(shè)置調(diào)零孔,，對(duì)照孔,，加藥孔。調(diào)零孔加培養(yǎng)基,、MTT,、二甲基亞砜。對(duì)照孔和加藥孔都要加細(xì)胞,、培養(yǎng)液,、MTT、二甲基亞砜,，不同的是對(duì)照孔加溶解藥物的介質(zhì),，而加藥組加入不同濃度的藥物。
⒏避免血清干擾,。用含15%胎牛血清培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),，高的血清物質(zhì)會(huì)影響試驗(yàn)孔的光吸收值。由于試驗(yàn)本底增加,，會(huì)試驗(yàn)敏感性,。因此，一般選小于10%胎牛血清的培養(yǎng)液進(jìn)行,。在呈色后,，盡量吸凈培養(yǎng)孔內(nèi)殘余培養(yǎng)液。