人elisa試劑盒顯色溫育反應(yīng)的重要性,!
閱讀:789 發(fā)布時(shí)間:2022-9-13
人elisa試劑盒的顯色是ELISA中的一步溫育反應(yīng),,此時(shí)酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物,。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素,。在一定時(shí)間內(nèi),,陰性孔可保持無色,,而陽性孔則隨時(shí)間的延長而呈色加強(qiáng)。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行,。在定量測定中,,加入底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測定的顯色可在室溫進(jìn)行,,時(shí)間一般不需要嚴(yán)格控制,,有時(shí)可根據(jù)陽性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時(shí)間,及時(shí)判斷,。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,,再延長反應(yīng)時(shí)間,,可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色,,顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行,,顯色反應(yīng)結(jié)束時(shí)加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用酸終止后,,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色,。
人elisa試劑盒標(biāo)本要求:
1.血清:溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
2.血漿:根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
3.尿液:無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照此實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。
5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,。