1.色譜柱信息

  Inertsil Amide液相色譜柱是在高純度硅膠基質(zhì)上鍵合烷基酰胺基的HILIC(Hydrophilic

Interaction Chromatography)模式色譜柱,，適合用于強極性至中等極性例如一些極性藥物、小生物分子的分離。Inertsil Amide液相色譜柱從硅膠基質(zhì)的合成,，到化學(xué)處理和裝填后的性能檢測,，都是在本公司嚴格的產(chǎn)品控制下進行，因此不同批次的柱與柱之間具有優(yōu)異的重現(xiàn)性;通過獨有的裝填技術(shù)填裝的Amide柱柱床密度均一穩(wěn)定,，從而確保色譜柱具有高柱效,，在極性和親水性化合物如碳水化合物、代謝物,、有機酸,、有機堿、氨基酸,、蛋白及多肽水解物等的分離過程中,，可作為改變柱選擇性和提高分辨率的分離工具。

  為了能長期保持Inertsil Amide液相色譜柱的優(yōu)越性能和正確的使用色譜柱,，在使用色譜柱之前請仔細閱讀本說明書,。

2.使用前的檢查與須知事項

●檢查包裝箱的外觀有無異常。

●打開包裝，檢查色譜柱的填料名稱,、尺寸規(guī)格,、連接形式是否相符。

●色譜柱中封存流動相為乙腈/水=95:5,，v/v,。

3.色譜柱填料規(guī)格

4.色譜柱安裝與操作

  色譜柱在運輸過程中，兩端用堵頭密封,。當(dāng)將色譜柱接入色譜儀器系統(tǒng)時,，首先請確保系統(tǒng)中的溶劑和液相柱中封存溶劑是互溶的。如果不能互溶,，請采用一種能夠與系統(tǒng)及色譜柱都能互溶的溶劑對系統(tǒng)進行充分過渡之后再將色譜柱連接到系統(tǒng)中,，并注意流動相的方向要與柱上標(biāo)記的方向保持一致。我公司提供的常規(guī)液相色譜柱標(biāo)準(zhǔn)接頭型式為1/16英寸Waters接頭螺絲型(如下左圖),，同時還有耐高壓液相系統(tǒng)的UP型(如下右圖)(目前Amide系列暫不提供UPLC柱),。如果需要其他接頭形式請另行咨詢。

色譜柱連接好之后,，請確認無漏液現(xiàn)象之后再進行后續(xù)操作,。

新的Amide柱是保存在乙腈/水(95:5,v/v)的溶液中，在儲存和運輸過程中,，硅膠填料可能會干涸,，推薦用純的乙腈沖洗10~20倍柱體積對色譜柱進行活化，流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速,。(如果在活化過程中即發(fā)現(xiàn)壓力和基線不正常時,，請及時聯(lián)系我公司工程師處理。)然后再用不含緩沖鹽的流動相進行平衡20倍柱體積,，再用流動相平衡,，待壓力和基線穩(wěn)定之后，再進樣分析,。

5.樣品與流動相

  為避免色譜柱堵塞，所有樣品及溶劑,，包括緩沖溶液在內(nèi),，在使用前必須用0.45μm或者0.22 μm的濾膜過濾。樣品溶劑需要含60-100%的有機溶劑,，水的比例應(yīng)盡量小,，推薦5%的水作為自動進樣器的清洗液。適用于HILIC分離的緩沖鹽體系為甲酸鹽和乙酸鹽,，因為即使再很高比例的有機溶劑中它們也有很好的溶解性,。避免使用磷酸鹽及其他低溶解性緩沖鹽，以防析出堵塞色譜柱,。對于大多數(shù)分析樣品,，推薦的緩沖鹽濃度為5-20mM,。避免使用其他非揮發(fā)性緩沖鹽、TFA或者離子對試劑,，它們會干擾HILIC分離機理,，并抑制MS信號。通常的HILIC應(yīng)用中,，一般使用50-95%濃度乙腈的水溶性緩沖鹽,，如甲酸鹽、乙酸鹽或者它

們的酸作為流動相,。流動相使用前請務(wù)必進行脫氣,。

6.色譜柱的保養(yǎng)

●pH Amide色譜柱可在pH2~7.5范圍內(nèi)使用，為保持色譜柱良好的壽命,，請避免較強的酸或堿性樣品或者流動相進入色譜柱,。

●耐壓 Amide常規(guī)色譜柱耐受壓力為20MPa，HP系列耐壓為50MPa,，但是正常的壓力建議控制在耐受壓力的2/3以下,。長時間在高壓下運行會對色譜柱造成難以修復(fù)的損害，因此系統(tǒng)壓力升高之后,，建議盡快排查系統(tǒng),，如果是色譜柱壓力升高，請及時采用適當(dāng)溶劑沖洗色譜柱,。

●溫度最高操作溫度為60℃,，長時間在高溫下操作會顯著降低色譜柱壽命。

●沖洗

1. 新柱平衡:新柱是保存在高比例的有機溶劑中,，建議先采用色譜柱保存流動相平衡色譜柱一段時間,，觀察基線和壓力是否正常，然后再通入流動相,。如果流動相中不使用緩沖鹽或離子對試劑,，直接用流動相平衡即可;如果流動相使用緩沖鹽，先要用高比例的水相充分過渡20倍柱體積,，然后進行流動相平衡,。

2.使用完畢后的清洗、保存及再使用時流動相的過渡:

①使用完畢后,，先用高比例的水相進行沖洗約20倍柱體積,。

②如果流動相中不使用緩沖鹽或離子對試劑，上述①完畢后,，用100%的有機溶劑沖洗約20倍柱體積,，然后此條件下進行保存，再使用時直接沖流動相即可。

③如果流動相中使用緩沖鹽或離子對試劑,，上述①完畢后,，用100%的有機溶劑沖洗約20倍柱體積，然后此條件下進行保存,，再使用時請務(wù)必用高比例的水相充分過渡20倍柱體積,，再通入流動相。

●儲存色譜柱長期不用,，建議日常沖洗方法完成之后,，再用純有機溶劑沖洗20倍柱體積，然后保存在此溶劑中,，之后卸掉色譜柱,，兩端用堵頭密封，并放在溫度變化小的場所,。