Spherisorb色譜柱的清洗,、再生和存放

A. 清洗與再生

  如果發(fā)生峰形改變、峰分叉,、出現(xiàn)肩峰,、保留時(shí)間改變、分離度變化或柱壓升高,，說明色譜柱可能已被污染,。更換當(dāng)前使用的保護(hù)柱通常可以恢復(fù)色譜柱的性能,。如果色譜柱性能未恢復(fù)(或者您沒有使用保護(hù)柱),，請(qǐng)遵循下文詳述的程序操作。為防止?jié)撛诘奈廴居绊憴z測(cè)器性能,，建議清洗期間斷開所有檢測(cè)器與色譜柱洗脫液的連接,。對(duì)任何清洗程序來說，反轉(zhuǎn)通過色譜柱的液流方向(反沖)都可能提升清洗效率,。

1,、反相色譜柱

  通常情況下，用純有機(jī)溶劑進(jìn)行沖洗(小心避免緩沖液出現(xiàn)沉淀)就足以去除大部分污染物,。如果沖洗不能解決問題,，可采用以下清洗和再生步驟沖洗色譜柱。請(qǐng)根據(jù)樣品和/或您認(rèn)為污染色譜柱的物質(zhì)的性質(zhì),，選擇與之匹配的常規(guī)清洗方法(見表4),。用20倍柱體積(例如對(duì)于4.6 x 250 mm色譜柱，使用80 mL溶劑)HPLC級(jí)溶劑沖洗色譜柱,。將流動(dòng)相溫度升至35-55℃可以提高清洗效率,。如果清洗和再生之后色譜柱性能仍然很差，請(qǐng)致電當(dāng)?shù)氐奈痔厥擂k事處獲得更多支持。

2,、正相色譜柱

  要再生色譜柱,，請(qǐng)泵送20-30倍柱體積的二氯甲烷和異丙醇通過色譜柱。也可以基于疑似污染物選用其他清洗溶劑,，例如四氫呋喃(THF),。

  保護(hù)柱需要根據(jù)樣品污染情況定期更換。當(dāng)系統(tǒng)背壓穩(wěn)步上升至設(shè)定壓力限值時(shí),，通常表明需要更換保護(hù)柱,。突然出現(xiàn)分叉峰也表明需要更換保護(hù)柱。

B.存放

  將色譜柱完全密封,，防止柱床因溶劑蒸發(fā)而變干,。

1．反相色譜柱

  如果色譜柱需要在室溫下存放超過四天，應(yīng)使用100%乙腈在室溫下保存色譜柱(氰基的色譜柱除外),。對(duì)于高溫應(yīng)用，請(qǐng)?jiān)谑褂煤罅⒓词褂?/span>100%乙腈保存色譜柱,，以便盡可能延長(zhǎng)色譜柱使用壽命,。

  切勿使用緩沖鹽洗脫液保存色譜柱。如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽,，存放前先用10倍柱體積(常規(guī)色譜柱體積請(qǐng)參閱表2)的HPLC級(jí)水/有機(jī)溶劑沖洗色譜柱,，然后用100%乙腈替換柱內(nèi)的水。如果不執(zhí)行這個(gè)中間步驟,，在引入100%乙腈時(shí),，色譜柱內(nèi)可能會(huì)出現(xiàn)緩沖鹽沉淀。

  注：上述儲(chǔ)存建議的例外是用于反相方法的氰基色譜柱,，這些色譜柱不應(yīng)儲(chǔ)存在100%中等極性溶劑中(乙腈,、甲醇、異丙醇),。將CN-RP色譜柱儲(chǔ)存在0.1M乙酸銨/乙腈中 50/50,。

2.正相色譜柱

  為了能在啟動(dòng)時(shí)快速平衡色譜柱，請(qǐng)使用常用流動(dòng)相保存正相色譜柱,。完全密封色譜柱避免柱床蒸發(fā)和干燥,。