Waters ACQUITY UPLC色譜柱怎么安裝和平衡,？

  Waters ACQUITY UPLC色譜柱專用于ACQUITY UPLC系統(tǒng)，它采用超純試劑在滿足cGMP要求并獲得ISO9001認證的工廠進行生產(chǎn),。每批ACQUITY BEH填料均采用酸性,、堿性和中性分析物進行了色譜分析測試，并且填料的指標控制嚴苛,，以保證色譜柱的重現(xiàn)性,。每根色譜柱都經(jīng)過單獨測試，色譜柱的性能圖譜和填料的批次檢驗證書一起存儲在eCord™智能芯片上,。

  ACQUITY Premier BEH色譜柱提供帶或不帶VanGuard™*集成技術(FIT)保護柱兩種規(guī)格,。VanGuard FIT保護柱專為延長分析柱使用壽命而設計，可減少樣品基質(zhì)的污染或顆粒物進入色譜柱,，而不會影響分離性能,。保護柱可輕松更換，以便恢復分離性能,，延長分析柱的使用壽命,。

  此外，ACQUITY Premier BEH色譜柱采用創(chuàng)新的MaxPeak™高性能表面技術,，能夠盡量減少分析物/表面相互作用,，避免可能因此造成的樣品損失，從而提高分析物回收率,、分析靈敏度和重現(xiàn)性,。

  每根ACQUITY BEH色譜柱的色譜柱包裝盒或eCord智能芯片中都隨附COA報告和性能測試報告。COA報告是針對填料的批次測試報告,，包括填料批號,、填料顆粒鍵和前和鍵合后的分析數(shù)據(jù)、測試結(jié)果和所用的測試條件,。性能測試色譜圖提供每根色譜柱的以下信息：批號,、色譜柱序列號、USP塔板數(shù)、USP拖尾因子,、保留因子以及色譜條件,。

a. eCord安裝（可能并非所有色譜柱配置都適用）

eCord智能芯片按鈕專用于ACQUITY UPLC和ACQUITY Arc™系統(tǒng)，需要裝在儀器柱溫箱模塊的側(cè)面,。eCord按鈕經(jīng)過磁化處理,，不需要專門的安裝操作。有關eCord智能芯片功能的更多信息,，請參閱相關維護和使用手冊,。

b. 色譜柱安裝（帶或不帶VanGuard FIT保護柱）

注：在處理ACQUITY BEH色譜柱和任何化學品之前，請咨詢您的安全主管部門和/或參照當?shù)胤ㄒ?guī),，使用適當?shù)姆雷o裝備,。ACQUITY BEH色譜柱出廠時保存于100%乙腈中。下述步驟給出的流速適用于內(nèi)徑2.1 mm的色譜柱,。

1. 灌注泵系統(tǒng),，排出含緩沖鹽的流動相，然后將色譜柱的入口端連接至進樣器出口,。

2. 通過將泵流速設置為0.1 mL/min,，并且在至少5 min增加至0.5 mL/min，用100%有機流動相（甲醇或乙腈）沖洗色譜柱,。

3. 當流動相可從色譜柱出口均勻流出時,，停流速，并將色譜柱出口連接至檢測器,。這能防止氣泡進入檢測系統(tǒng),。

4. 按照步驟2所述逐漸增加流速。

5. 一旦柱壓和基線達到穩(wěn)定狀態(tài),，即可繼續(xù)進行下一部分操作,。

c. 色譜柱平衡

在更換為其他流動相體系之前，務必確保流動相的兼容性,。請用至少10倍柱體積的流動相平衡色譜柱（色譜柱體積請參見表1）,。當色譜柱達到恒定背壓時，可認為該柱已達到熱力學平衡,。

表1.不同規(guī)格色譜柱柱體積(mL)（乘以 10得到?jīng)_洗色 譜柱所用的流動相體積）

  為了避免流動相緩沖鹽在色譜柱或系統(tǒng)中發(fā)生析出,，請使用5倍柱體積的水/有機溶劑混合溶液沖洗色譜柱，其中有機溶劑比例應與所需緩沖鹽流動相中的有機溶劑比例相同或更低,。（例如,，引入60%甲醇/40%緩沖鹽流動相之前，應使用60%甲醇水溶液沖洗色譜柱和系統(tǒng),。）

  對于采用BEH HILIC填料的色譜柱,，用50倍柱體積的50:50乙腈:水溶液（含最終濃度為10mM的緩沖鹽）進行沖洗,。對于采用BEH Amide填料的色譜柱，用50倍柱體積的60:40乙腈:水溶液進行沖洗,。進第一針樣品前，用20倍柱體積的流動相（初始條件）平衡色譜柱（色譜柱體積請參見表1）,。請參閱“BEH HILIC色譜柱入門”或“Amide色譜柱入門”獲取詳細信息,。

d. 初始柱效測定

1. 使用色譜柱之前，需要先進行柱效測試,。這項測試可包括 ：

a. 您所在實驗室常用的混合標準品,，和/或

b. Waters柱性能測試報告中測試柱效所用的標準品。

注：如果采用(b)項的分析物進行柱效測試,，在等度條件下測得的柱效可能低于沃特世色譜柱性能報告中所示的柱效,。這種情況是正常的。為了盡可能減小系統(tǒng)體積,，沃特世的等度色譜柱測試系統(tǒng)進行了相應的改進,。這對于色譜柱填充質(zhì)量的考察相當具有挑戰(zhàn)性，可確保色譜柱被最好地裝填,。

  這些經(jīng)過改造的特殊測試系統(tǒng)不再具有商業(yè)可行性,，方法的靈活性亦受限，只能用于等度色譜柱測試,。

2. 測定理論塔板數(shù)(N),，并定期對比該數(shù)值。

3. 按預定的時間間隔進行重復測試,，跟蹤色譜柱性能隨時間的變化情況,。所得柱效結(jié)果可能會有微小差異，這可能是由于連接質(zhì)量,、運行環(huán)境,、系統(tǒng)電子設備、試劑質(zhì)量,、色譜柱條件和操作員技術等方面存在差異所致,。

e. 色譜柱QR碼

色譜柱標簽上的快速參考卡(QR)碼可提供色譜柱專有信息（即色譜柱的唯yi標識符 - P/N和序列號），這些信息按照廣泛采用的行業(yè)標準進行編碼,。

1. 可使用任何能掃描QR碼的設備進行掃描（即使用智能手機和平板電腦的內(nèi)置攝像頭應用程序進行掃描）,。

2. QR碼直接鏈接至waters.com的色譜柱信息中心。

3. 獲取關于色譜柱的技術信息和專業(yè)信息（即COA報告和應用紀要）,。

f. VanGuard保護柱

  VanGuard保護柱專門用于ACQUITY UPLC色譜柱和ACQUITYUPLC系統(tǒng),。這些2.1 mm（內(nèi)徑）× 5 mm（長）的保護柱設備所使用的UPLC填料和篩板與沃特世內(nèi)徑2.1 mm的UPLC色譜柱相同。VanGuard保護柱可直接連接至ACQUITY UPLC色譜柱的入口端,。

注：為了確保VanGuard保護柱的連接無空隙且無滲漏,，在出廠時未將保護柱的箍環(huán)和錐箍進行永jiu性固定,。取下將這兩個部件固定至保護柱管路的O形圈時，必須謹慎操作,。

安裝說明

1. 將VanGuard保護柱從包裝盒中取出,，移去塑料塞頭。

2. 調(diào)整保護柱方向使其外接頭朝上,，小心取下在運輸期間用于固定箍環(huán)和錐箍的橡膠O形圈（箍環(huán)和錐箍尚未永jiu性固定）,。

3. 使ACQUITY UPLC色譜柱垂直于工作臺表面，且色譜柱入口朝下（色譜柱出口朝上）,。

4. 將VanGuard保護柱從下方插入ACQUITY UPLC色譜柱入口,，并用手擰緊（箍環(huán)和錐箍尚未永jiu性固定）。

5. 將VanGuard保護柱推入色譜柱入口后,，將組裝好的色譜柱和保護柱翻轉(zhuǎn)180°,，使保護柱位于上方。

6. 如上圖所示,，將兩個5/16英寸扳手分別置于ACQUITY UPLC色譜柱的平坦部分和VanGuard保護柱六角螺母（外接頭）處,，然后擰緊。

7. 擰緊1/4圈,，固定箍環(huán)和錐箍,。

8. 松開接頭并檢查錐箍深度，確保錐箍*固定,。經(jīng)適當固定后,，錐箍深度將與ACQUITY UPLC系統(tǒng)中其他連接相似。

9. 重新連接保護柱,，使流動相流經(jīng)保護柱,，檢查滲漏情況。

g. VanGuard FIT保護柱

  VanGuard FIT保護柱專門用于ACQUITY Premier色譜柱,。對于帶VanGuard FIT保護柱的ACQUITY Premier色譜柱,，可以使用兩個3/8英寸扳手更換VanGuard FIT保護柱。只需用扳手咬合住保護柱和色譜柱末端螺母的平坦部分,，然后逆時針轉(zhuǎn)動（見圖1）,，即可拆下VanGuard FIT保護柱，然后按照實驗室規(guī)范合理棄置,。

  接下來可以使用新的VanGuard FIT保護柱更換棄置的保護柱,。沿順時針方向用手擰緊新的保護柱，再用兩個3/8英寸扳手擰緊,。正確密封的位置不應超過手擰緊處的1/4圈,。