面對類型如此眾多的酶標儀,,實驗室在選擇時往往有難以適從的感覺,。一般來說,用于酶免疫測定比色的酶標儀可分為普通酶標儀,,多功能全自動酶標儀和全自動酶免疫分析系統(tǒng)等,,普通酶標儀的功能基本上相當于一個微孔板比色計,而多功能全自動酶標儀除了有微孔板比色功能外,,還有酶標動力學,,紫外乃至凝集等多種檢測功能;全自動酶免疫分析系統(tǒng)則有試劑“開放”和“限定”之分,所謂試劑“開放”是指不同品牌的ELISA試劑均可用于該儀器,,而試劑“限定”則必須使用儀器的酶免測定試劑,。實驗室在選擇酶標儀時,,一般應遵循這樣幾條原則:
1.根據(jù)工作需要去選擇
切忌刻意去求功能多,因為一則如果儀器功能過多,,易出故障,,二則有些功能如酶標動力學或凝集等,可能根本就用不上;如果擬購置的酶標儀主要是用于定性測定,,則不必要求的定量所需的軟件系統(tǒng),。至于全自動酶免疫分析系統(tǒng)則對工作量比較大的血站或大型醫(yī)院較為適用,對于日常工作量不太大的實驗室,,就無必要,。
2.根據(jù)酶標儀的性能去選擇
反應酶標儀性能的指標主要有測定波長范圍,濾光片配置,,檢測速度,,吸光度范圍,線性范圍,,分辨率,,準確度,精密度等,。
3.根據(jù)自己實驗室的財力去選擇
酶標儀品種類型多,,由于性能不一,價格自然也就相差較大,,實驗室可根據(jù)自己的財力去選擇性能/價格比較為合適的酶標儀,。
4.根據(jù)售后服務(wù)去選擇
實驗室儀器買了以后,就跟我們家里使用的家用電器一樣,,在使用過程中及使用一段時間之后,,很可能就會有保修或維修方面的問題,因此一定要選擇售后服務(wù)好的公司的酶標儀,。
5.根據(jù)實驗室人員的外語水平去選擇
進口酶標儀現(xiàn)有不少已使用中文人機對話,,對于英語上有困難的實驗室,應盡可能選用此類酶標儀,。
確定了選擇原則以后,,就是怎樣去選擇了。選擇的步驟首先是要獲取有關(guān)酶標儀的信息資料,,一般有這樣幾條途徑:
?、傧蛞奄彶煌笜藘x的多家實驗室同行咨詢訪問,獲取直接的使用效果的信息;
?、诿笜藘x銷售商的信息廣告及介紹;
?、蹤C構(gòu)的儀器評估報告。
獲取了盡可能多的酶標儀信息資料后,就是對不同類型的酶標儀的性能指標進行比較,,選擇較為適合本實驗室的一種或二,,三種再向銷售商作進一步的詳細咨詢了解,以決定選擇哪一種進行自檢,。
酶標儀的自檢和校準
從上述所獲的酶標儀性能的有關(guān)信息資料,,基本上可以說是間接的,有了目標以后,,如果還想獲得對某一酶標儀的感性認識,,可以對其進行自檢,,主要有下述幾個方面,。
1.外觀
酶標儀上應有儀器名稱,型號,,編號,,生產(chǎn)廠家,出廠日期和電源電壓;各調(diào)節(jié)旋鈕,,按鍵和開關(guān)均能正常工作,,外表面無明顯機械損傷;顯示文字應清楚完整。
2.酶標儀的穩(wěn)定性(漂移)
選用492nm波長,,在吸光度0.0A處,,測定標稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測定操作按儀器說明進行),記錄儀器示值或均值,,10min后再次記錄儀器示值或均值,,前后兩次測定值之差不應超過±0.00。
3.吸光度測定的準確度
選用405,,492和620 nm波長,,以空氣為參比,分別測定標稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片,,用測試板代替酶標板,,按儀器說明連續(xù)測定3次,按下式計算準確度:AA=1/3(A,、+A,。+A3)—A:(A:為標準值)。
4.吸光度測定的重復性
波長選擇同(3),,在酶標板排加注空白溶液,,第二排加入濃度為200rig/mL的重鉻酸鉀溶液,重復測定5次,。記錄每次測定的第二排吸光度值,,取第二排任一孔吸光度值與各次對應孔吸光度值。按下式計算重復性:
5.酶標儀的線性
選用540nm波長,將標稱值0.5,,1.0A中性濾光片分別放入測試板樣本位置中,,以空氣為參比,各重復測定3次;然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于測試板的同一孔位中,,重復測定3次,。線性誤差:
式中A1為片中性濾光片吸光度均值,A:為第二片中性濾光片吸光度均值,,A1,,2為兩片中性濾光片疊加后的吸光度均值。
6.測定速度的檢定
選用492nm波長,,放人96孔酶標板進行測定,,用秒表計測儀器打印出全部數(shù)據(jù)的時間。
酶標儀除了在選購時,,應盡可能自檢外,,在使用中也應定期檢定,以保證酶標儀測定的有效性,。
附:200ttg/mL重鉻酸鉀溶液的配制
將重鉻酸鉀固體試劑放人稱量瓶中(去蓋)置于烘箱中,,在105±5℃下烘2h后,置于干燥器內(nèi)冷卻30min,,在分析天平上準確稱取0.2829g,,置于100mL燒杯中,用0.05mol/L稀硫酸溶解后,,移入500mL容量瓶中,,以少量0.05mol/L稀硫酸洗燒杯3次,洗液并入容量瓶中,,用0.05mol/L稀硫酸稀釋至刻度線,,搖勻。
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