上海RNA操作步驟:

　　1. 勻漿處理:

　　a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理,。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅,。

　　b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積（即3.5cm直徑的培養(yǎng)板）加1ml,，用移液器吸打幾次,。TRIzol的用量應根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù),。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染,。

　　c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物,、植物,、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打,。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解,。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。

　　上海RNA將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘,，使核酸蛋白復合物*分離,。

　　1．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪,，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉,，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清,。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA,。處理脂肪組織時,，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作,。

　　2. 2-8℃10000×g離心15分鐘,。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層,。RNA主要在水相中,，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

　. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA,。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇,，室溫放置10分鐘。

　　1. 2-8℃10000×g離心10分鐘,，離心前看不出RNA沉淀,，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清,。

　2. 用75℅乙醇洗滌RNA沉淀,。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超過7500×g離心5分鐘,，棄上清,。

　　3.室溫放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大約晾5-10分鐘即可.不要真空離心干燥,，過于干燥會導致RNA的溶解性大大降低,。加入25-200μl無RNase的水或0.5℅SDS,用槍頭吸打幾次,55-60℃放置10分鐘使RNA溶解.如RNA用于酶切反應,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去離子甲酰胺溶解,，-70℃保存,。