目錄:北京博蕾德科技發(fā)展有限公司>>Chondrex>>膠原檢測>> 天狼猩紅總膠原檢測試劑盒 Sirius Red
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T |
---|---|---|---|
貨號 | 9062 | 應用領域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 總膠原檢測試劑盒 |
天狼猩紅總膠原檢測試劑盒
Sirius Red Total Collagen Detection Assay Kit(Catalog # 9062)
僅用于科研,,不可用于診斷
背景簡介:
天狼星紅是一種*的染料,它與纖維性膠原(I型至V型)上的[Gly-X-Y]n螺旋結構特異性結合,,不區(qū)分膠原蛋白種類和膠原類型,,因此用于總膠原的檢測。Chondrex提供天狼星紅總膠原蛋白檢測試劑盒,,用于檢測樣本,,包括:組織,、細胞培養(yǎng)液和細胞中的總膠原蛋白。該試劑盒可檢測40例樣本(復孔),,實驗時間少于30min,。由于細胞培養(yǎng)液總的膠原含量較低,可能需要對樣本做濃縮處理,。
產(chǎn)品說明:
產(chǎn)品描述:用于檢測樣本中的總膠原
形式:96孔可拆版
檢測方法:比色法
實驗時間:30min
檢測范圍:500 µg/ml to 8 µg/m
檢測數(shù)量:40(復孔)樣本/板
樣本類型:組織勻漿,、細胞培養(yǎng)液、細胞
樣本稀釋比:根據(jù)樣本類型而定
發(fā)色團:N/A(510-550nm讀取)
保存:-20℃ 保存12個月
試劑盒組成:
組分 | 數(shù)量 | 規(guī)格 | 保存溫度 |
標準品-牛II型膠原(90621) | 1 | 0.5 mg/ml, 1 ml | -20°C |
天狼猩紅溶液(90622) | 1 | 50 ml | -20°C |
洗液(90623) | 1 | 50 ml | -20°C |
提取液(90624) | 1 | 30 ml | -20°C |
0.5M醋酸(10X醋酸)(90625) | 1 | 20ml | -20°C |
96孔板(9026) | 1 | 8-well strips x 12 | -20°C |
注:1)洗液,,提取液,,0.5M的醋酸和96孔板也可以室溫保存
2)用于細胞培養(yǎng)液樣本的的濃縮液(50 ml, Catalog # 90626))不包括在盒子內(nèi),需要單獨訂購,。
樣本制備:
可用于檢測組織勻漿樣本和細胞,。固體樣本需要溶解后檢測。此外,,細胞培養(yǎng)液需要做濃縮處理(請參照第三頁實驗步驟),。另外,熱變性的膠原對天狼猩紅的結合性差,,會導致結果值偏低,。
依據(jù)溶解緩沖液的不同,以下膠原樣本可用于檢測:
中性緩沖液溶解的膠原溶液(0.15mol/L NaCl in 0.1M Tris-HCl, pH 7.4)
醋酸溶解的膠原溶液(0.05mol/L的醋酸)
含胃蛋白酶的膠原溶液(0.05mol/L的醋酸,,含胃蛋白酶)
Chondrex 推薦“制備含胃蛋白酶的可溶液膠原溶液"制備方案
細胞培養(yǎng)液樣本制備:
含高濃度血清的細胞培養(yǎng)物會導致高背景值,。因此,我們推薦用PBS降低細胞培養(yǎng)物中的血清濃度到5%,。
樣本濃縮:
細胞培養(yǎng)物中的血清濃度一般來說很低,,因此用試劑盒直接檢測細胞培養(yǎng)物中的膠原很難檢測得到。Chondrex公司通過濃縮液(Cat # 90626)參照樣本濃縮流程對樣本進行濃縮,。如果檢測細胞培養(yǎng)物,,請設置陰性對照,,用濃縮液的話可能會導致背景升高,。
加入1ml細胞培養(yǎng)液
加入250ul濃縮緩沖液
渦旋混勻后,4℃孵育16-24小時
10000rpm離心3min
棄上清液
加入100ul 0.05mol/L的醋酸溶解沉淀物,。用溶解后的樣本,,作為檢測樣本。
樣本中膠原濃度為測定值x0.1,。
操作流程:
加入100ul稀釋后的標準品和樣本到管內(nèi),。
加入500ul天狼猩紅溶液到管內(nèi)
混勻后,室溫孵育20min,10000rmp離心3min,小心吸取上清,,并棄上清,。
加入250ul提取液到各管內(nèi),。
渦旋混勻使沉淀物*溶解。
從各管內(nèi)取200ul到檢測板
讀取530nm(510-550nm)吸光度
注意:
推薦標準品和樣本均做復孔檢測
所有的緩沖液在用前置于室溫平衡,。
用移液管準確定量緩沖液體積,,提供的緩沖液都是足量的。
如果一次用不完的原液試劑,,請還在原瓶內(nèi)-20℃保存,,用于后續(xù)實驗。
試劑盒含有未感染的動物的動物組分,,丟棄請做生物安全處理,。
實驗流程:
1X醋酸溶液制備:用雙蒸水,制備足夠的1X醋酸溶液(0.05M),。
標準品制備:用1.5ml離心管或者細胞培養(yǎng)管制備標準品溶液,,加入250ul 0.05mol/L的醋酸(空白)到7管內(nèi)。加入250ul標準品(500ug/ml)和等體積的0.05mol/L的醋酸混合(250ug/ml),。一次重復此步驟,,制備:125,63,31.5,16,和8ug/ml標準品溶液
樣本制備:用1.5ml離心管或者細胞培養(yǎng)管制備樣本溶液,。如果樣本中的膠原濃度范圍不確定,,需要用0.05mol/L的醋酸溶液做系列稀釋后,確定樣本大概范圍后再檢測,。
加入樣本和標準品:加入100ul ,空白,,稀釋后的標準品和樣本到離心管內(nèi),做復管,。
加入天狼猩紅溶液:加入500ul天狼猩紅溶液到各管,。渦旋混勻,室溫孵育20min,。
離心:10000rpm離心3min,。去除上清,不要接觸底部的沉淀物,。如果不小心接觸到,,重新離心,小心去除上清,。
加入洗液:加入500ul洗液到各管,。渦旋混勻后,重懸沉淀物,。
離心:10000rpm離心3min,。去除上清,不要接觸底部的沉淀物,。如果不小心接觸到,,重新離心,,小心去除上清。
加入提取液:加入250ul提取液到各管,。渦旋混勻后,,充分溶解。
讀數(shù):從各管取200ul到96孔板,。讀取510-550nm的吸光度值,。
結果計算:
計算標準品,空白和檢測樣本的OD平均值,。
用標準品和樣本OD平均值減去空白OD均值,。
Y軸做OD值,X軸做標準品濃度,,制作標準曲線,。
通過回歸曲線計算樣本濃度。樣本實際濃度應在測值的基礎上乘以相應的稀釋倍數(shù),。
如果OD值超出標準品檢測范圍,,請對樣本做稀釋后,再檢測,。