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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2024-10-07 13:24:06瀏覽次數(shù):1797次
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土霉素(Oxytetracycline)ELISA試劑盒標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
土霉素(Oxytetracycline)ELISA試劑盒結(jié)果判定
定性測(cè)定
定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無"的簡(jiǎn)單回答,,分別用"陽性"、"陰性"表示,。"陽性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng),。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,,即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度,,其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中,,將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn),,呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低,,可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱,,這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性更具定量意義,。 在間接法和夾心法ELSIA中,,陽性孔呈色深于陰性孔。在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中則相反,,陰性孔呈色深于陽性孔,。兩類反應(yīng)的結(jié)果判斷方法不同,分述于下,。
(1) 間接法和夾心法
這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷,。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性,顯色清晰者為陽性,。但在ELSIA中,,正常科研血清反應(yīng)后??沙霈F(xiàn)呈色的本底,,此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗(yàn)的條件不同而異,因此實(shí)驗(yàn)中必須加測(cè)陰性對(duì)照,。陰性對(duì)照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6),。在用肉眼判斷結(jié)果時(shí),更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo),。目視法簡(jiǎn)捷明了,,但頗具主觀性。在條件許可下,,應(yīng)該用比色計(jì)測(cè)定吸光值,,這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本(sample,S),、陽性對(duì)照(P),、和陰性對(duì)照(N)的吸光值,然后進(jìn)行計(jì)算,。計(jì)算方法有多種,,大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對(duì)照比值法兩類。
a. 陽性判定值
陽性判定值(cut-off value)一般為陰性對(duì)照A值加上一個(gè)特定的常數(shù),,以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn),。用此法判斷結(jié)果要求實(shí)驗(yàn)條件十分恒定,試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化,,陽性和陰性的對(duì)照品應(yīng)符合一定的規(guī)格,,須配用精密的儀器,并嚴(yán)格按規(guī)定操作,。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對(duì)大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)而得到的?,F(xiàn)舉某種檢測(cè)HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,,陽性對(duì)照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml,。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A值后,,先計(jì)算陰性對(duì)照A值的平均數(shù)(NCX)和陽性對(duì)照A值的平均數(shù)(PCX),,兩個(gè)平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值(例0.400),試驗(yàn)才有效,。3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,,則棄去,,而已另兩個(gè)陰性對(duì)照重新計(jì)算NCX;如有兩個(gè)陰性對(duì)照A值超出以上范圍,,則該次實(shí)驗(yàn)無效,。陽性判定值按下式計(jì)算:
陽性判定值=NCX+0.05 標(biāo)本A值>陽性判定值的為陽性,小于陽性判定值的為陰性,。應(yīng)注意的是,,式中0.05為該試劑盒的常數(shù),只適合于該特定條件下,,而不是對(duì)各種試劑均可通用。
根據(jù)以上敘述可以看出,,在這種方法中陰性對(duì)照和陽性對(duì)照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控作用,,試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會(huì)產(chǎn)生"試驗(yàn)無效"的后果。
b.標(biāo)本/陰性對(duì)照比值
在實(shí)驗(yàn)條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,,這種判斷法較為合適,。在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的A值后,,計(jì)算S/N值。也有寫作P/N的,,這里的P不代表陽性(positive),,而是樣本(patient)的縮寫,不應(yīng)誤解,。為避免混淆,,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中,,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),,現(xiàn)多為各種測(cè)定所沿用。實(shí)際上每一測(cè)定系統(tǒng)應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的S/N的閾值,。更應(yīng)注意的是,,N所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的科研血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對(duì)照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正??蒲醒宓谋镜椎偷枚唷R虼?,這類試
b. 抑制率法
抑制率表示標(biāo)本在競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合中標(biāo)本對(duì)陰性反應(yīng)顯色的抑制程度,,按下式計(jì)算:抑制率(%)= (陰性對(duì)照A值-標(biāo)本A值)×100%/陰性對(duì)照A值.一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性,<50%為陰性,。
定量測(cè)定
ELSIA操作步驟復(fù)雜,,影響反應(yīng)因素較多,特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的*,,因此在定量測(cè)定中,,每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,,曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0,繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)紙,,以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo),,以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點(diǎn)連接,,所得曲線一般呈S形,,其頭、尾部曲線趨于平坦,,中央較呈直線的部分是的檢測(cè)區(qū)域,。
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