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人腺苷脫氨酶（ADA）ELISA試劑盒實驗中的顯色和比色 
（1） 顯色 
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應,，此時酶催化無色的底物生成有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素,。在一定時間內,，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強,。適當提高溫度有助于加速顯色進行,。在定量測定中，加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確,。定性測定的顯色可在室溫進行,，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間,，及時判斷,。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深，再延長反應時間,，可使本底值增高,。OPD底物液受光照會自行變色,，顯色反應應避光進行，顯色反應結束時加入終止液終止反應,。OPD產物用硫酸終止后,，顯色由橙黃色轉向棕黃色。 TMB受光照的影響不大,，可在室溫中置于操作臺上,，邊反應觀察結果。但為保證實驗結果的穩(wěn)定性,，宜在規(guī)定的適當時間閱讀結果,。TMB經HRP作用后，約40分鐘顯色達,，隨即逐漸減弱,，至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種,，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應終止,。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑,。此外,，各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值,。
人腺苷脫氨酶（ADA）ELISA試劑盒（2） 比色 
比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,，然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗,，需先將板置于標準96孔的座架中,，才可進行比色。在加底物液顯色前,，先將軟板邊緣剪凈,，這樣，此板就可*平妥坐入座架中,。比色時應先以蒸餾水校零點,，測讀底物孔（未經任何反應僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔），以記錄本次試驗的試劑狀況,。其后可用空白孔以蒸餾水校零點,，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進行計算,。比色結果的表達以往通用光密度（oplical density,，OD），現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（absorbence，A）,，兩者含義相同,。通常的表示方法是，將吸收波長寫于A字母的右下角,，如OPD的吸收波長為492nm,，表示方法為"A492nm"或"OD492nm"。
（3） 酶標比色儀 
酶標比色儀簡稱酶標儀,，通常指于測讀ELISA結果吸光度的光度計,。針對固相載體形式的不同,，各有特制的適用于板,、珠和小試管的設計。許多試劑公司配套供應酶標儀,。酶標儀的主要性能指標有：測讀速度,、讀數(shù)的準確性、重復性,、精確度和可測范圍,、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,，準確性為±1%,，重復性達0.5%。舉例說,，若某孔測得的A值為1.083,，則該孔相對于空氣的真實A值應為1.083±0.01（1.073~1.093），重復測定數(shù)次,，其A值均應1.083±0.05（1.078~1.088）在之間,。酶標儀的可測范圍視各酶標儀的性能而不同。普通的酶標儀在0.000~2.000,，新型號的酶標儀上限拓寬達2.900,，甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示,。應注意可測范圍與線性范圍的不同,，線性范圍常小于可測范圍，比如某一酶標儀的可測范圍為0.000~2.900,，而其線性范圍僅0.000~2.000,，這在定量ELISA中制作標準曲線時應予注意。 酶標儀不應安置在陽光或強光照射下,，操作時室溫宜在15~30℃,，使用前先預熱儀器15-30分鐘，測讀結果更穩(wěn)定。測讀A值時,，要選用產物的敏感吸收峰,，如OPD用492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀,，即每孔先后測讀兩次,，*次在zui適波長（W1），第二次在不敏感波長（W2）,，兩次測定間不移動ELISA板的位置,。例如OPD用492nm為W1，630nm為W2,，zui終測得的A值為兩者之差（W1-W2）,。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。各種酶標儀性能有所不同,，使用中應詳細新聞記者說明書,。

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