所有產(chǎn)品僅供科研使用,，不能用于食用和醫(yī)療等

腫瘤壞死因子β（TNF-β）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍：                                                            96T
10ng/L-320 ng/L
 
使用目的：
本試劑盒用于測定科研血清、血漿及相關(guān)液體樣本中腫瘤壞死因子β（TNF-β）含量,。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人腫瘤壞死因子β（TNF-β）水平,。用純化的
人腫瘤壞死因子β（TNF-β）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次
加入腫瘤壞死因子β（TNF-β） ，再與 HRP 標記的腫瘤壞死因子β（TNF-β）抗體結(jié)合,，
形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催
化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子
β（TNF-β）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計
算樣品中人腫瘤壞死因子β（TNF-β）濃度,。  
試劑盒組成  
1  30倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標試劑  6ml×1瓶  8  標準品（640 ng/L）  0.5ml×1 瓶
3  酶標包被板  12 孔×8條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張   
6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個 
腫瘤壞死因子β（TNF-β）酶聯(lián)免疫分析試劑盒標本要求  
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。 
 
腫瘤壞死因子β（TNF-β）酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋,。
320 ng/L  5 號標準品  150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
160 ng/L  4 號標準品  150µl的5 號標準品加入150µl標準品稀釋液
80 ng/L  3 號標準品  150µl的4 號標準品加入150µl標準品稀釋液
40 ng/L  2 號標準品  150µl的3 號標準品加入150µl標準品稀釋液
20 ng/L  1 號標準品  150µl的2 號標準品加入150µl標準品稀釋液
 
   2
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同） 、標準孔,、
待測樣品孔,。 在酶標包被板上標準品準確加樣50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,，
然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。    
4.  配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復(fù) 5次，拍干,。
6.  加酶：每孔加入酶標試劑50µl,，空白孔除外。  
7.  溫育：操作同3,。
8.  洗滌：操作同5,。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.  終止：每孔加終止液 50µl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 。
11.  測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） ,。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行。
 
操作程序總結(jié)：
 
 
計算   3
    以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式， 將樣品的OD值代入方程式,， 計算出樣品濃度,， 再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度,。  
 
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值） ,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存： ,；2-8℃,。
2．有效期：6個月 

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