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人吖啶橙(AO)ELISA試劑盒實驗中的洗滌
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的,。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來,。可以說在ELISA操作中,,洗滌是zui主要的關鍵技術,,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,,不得馬虎,。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,人吖啶橙(AO)ELISA試劑盒手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,,過程如下:
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內反應液,;b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),;c.浸泡,,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,,間歇搖動,,浸泡時間不可隨意縮短;d.吸干孔內液體,。吸干應*,可用水泵或真空泵抽吸,,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干,;e.重復操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定),。在間接法中如本底較高,,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法,。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液,。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,,也含親水基團,,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,,并借助于親水基團和水分子的結合作用,,使蛋白質回復到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,,其濃度可在0.05%-0.2%之間,,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度,。
(2)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,,持續(xù)沖洗2分鐘后,吸干液體,,再用蒸餾水浸泡2分鐘,,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,,流水沖洗式則好比淋浴,,其洗滌效果更為*,且也簡便,、快速,。已有實驗表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌,。洗滌時設法加大水流量或加大水壓,,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳,。
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