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人8-異構(gòu)前列腺素F2α（8-epi-PGF2α）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的顯色和比色 
（1） 顯色 
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng)，此時(shí)酶催化無(wú)色的底物生成有色的產(chǎn)物,。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素,。在一定時(shí)間內(nèi)，陰性孔可保持無(wú)色,，而陽(yáng)性孔則隨時(shí)間的延長(zhǎng)而呈色加強(qiáng),。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行。在定量測(cè)定中,，加入底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確,。定性測(cè)定的顯色可在室溫進(jìn)行，時(shí)間一般不需要嚴(yán)格控制,，有時(shí)可根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,，及時(shí)判斷,。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深，再延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,，可使本底值增高,。OPD底物液受光照會(huì)自行變色，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行,，顯色反應(yīng)結(jié)束時(shí)加入終止液終止反應(yīng),。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色,。 TMB受光照的影響不大,，可在室溫中置于操作臺(tái)上，邊反應(yīng)觀察結(jié)果,。但為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性,，宜在規(guī)定的適當(dāng)時(shí)間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后,，約40分鐘顯色達(dá),，隨即逐漸減弱，至2小時(shí)后即可*消退至無(wú)色,。TMB的終止液有多種,，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長(zhǎng)時(shí)間（12-24小時(shí)）不褪,，是目視判斷的良好終止劑,。此外，各類酸性終止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,，此時(shí)可用特定的波長(zhǎng)（450nm）測(cè)讀吸光值,。
人8-異構(gòu)前列腺素F2α（8-epi-PGF2α）ELISA試劑盒（2） 比色 
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中,。以軟板為載體的試驗(yàn),，需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中，才可進(jìn)行比色,。在加底物液顯色前,，先將軟板邊緣剪凈，這樣,，此板就可*平妥坐入座架中,。比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn)，測(cè)讀底物孔（未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過(guò)程的孔）,，以記錄本次試驗(yàn)的試劑狀況,。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn)，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,，然后進(jìn)行計(jì)算,。比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度（oplical density,，OD），現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（absorbence,，A）,，兩者含義相同。通常的表示方法是,，將吸收波長(zhǎng)寫于A字母的右下角,，如OPD的吸收波長(zhǎng)為492nm，表示方法為"A492nm"或"OD492nm",。
（3） 酶標(biāo)比色儀 
酶標(biāo)比色儀簡(jiǎn)稱酶標(biāo)儀,，通常指于測(cè)讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計(jì)。針對(duì)固相載體形式的不同,，各有特制的適用于板,、珠和小試管的設(shè)計(jì)。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀,。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測(cè)讀速度,、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性,、精確度和可測(cè)范圍,、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,，準(zhǔn)確性為±1%,，重復(fù)性達(dá)0.5%,。舉例說(shuō),，若某孔測(cè)得的A值為1.083，則該孔相對(duì)于空氣的真實(shí)A值應(yīng)為1.083±0.01（1.073~1.093）,，重復(fù)測(cè)定數(shù)次,，其A值均應(yīng)1.083±0.05（1.078~1.088）在之間。酶標(biāo)儀的可測(cè)范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同,。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,，新型號(hào)的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900，甚至更高,。超出可測(cè)上限的A值常以"*"或"over"或其它符號(hào)表示,。應(yīng)注意可測(cè)范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測(cè)范圍,，比如某一酶標(biāo)儀的可測(cè)范圍為0.000~2.900,，而其線性范圍僅0.000~2.000，這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)予注意,。 酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下,，操作時(shí)室溫宜在15~30℃,，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，測(cè)讀結(jié)果更穩(wěn)定,。測(cè)讀A值時(shí),，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波長(zhǎng),。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀,，即每孔先后測(cè)讀兩次，*次在zui適波長(zhǎng)（W1）,，第二次在不敏感波長(zhǎng)（W2）,，兩次測(cè)定間不移動(dòng)ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1,，630nm為W2,，zui終測(cè)得的A值為兩者之差（W1-W2）。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。各種酶標(biāo)儀性能有所不同,，使用中應(yīng)詳細(xì)新聞?dòng)浾哒f(shuō)明書。

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