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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2024-10-07 07:24:16瀏覽次數(shù):856次
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人1,3-二磷酸甘油酸(1,3-DPG)ELISA 結(jié)果判定
定性測定
定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答,,分別用"陽性"、"陰性"表示,。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng),。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,,即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度,,其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測定中,,將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn),,呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低,,可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱,,這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性更具定量意義,。 在間接法和夾心法ELSIA中,,陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反,,陰性孔呈色深于陽性孔,。兩類反應(yīng)的結(jié)果判斷方法不同,分述于下,。
(1) 間接法和夾心法
這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷,。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性,顯色清晰者為陽性,。但在ELSIA中,,正常科研血清反應(yīng)后??沙霈F(xiàn)呈色的本底,,此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗(yàn)的條件不同而異,,因此實(shí)驗(yàn)中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6),。在用肉眼判斷結(jié)果時(shí),,更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。目視法簡捷明了,,但頗具主觀性,。在條件許可下,應(yīng)該用比色計(jì)測定吸光值,,這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù),。先讀出標(biāo)本(sample,S),、陽性對照(P),、和陰性對照(N)的吸光值,然后進(jìn)行計(jì)算,。計(jì)算方法有多種,,大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對照比值法兩類。
a.人1,3-二磷酸甘油酸(1,3-DPG)ELISA 試劑盒陽性判定值
陽性判定值(cut-off value)一般為陰性對照A值加上一個(gè)特定的常數(shù),,以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn),。用此法判斷結(jié)果要求實(shí)驗(yàn)條件十分恒定,試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化,,陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格,,須配用精密的儀器,并嚴(yán)格按規(guī)定操作,。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢測而得到的?,F(xiàn)舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,,陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml,。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽性對照和3個(gè)陰性對照。測得A值后,,先計(jì)算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),,兩個(gè)平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值(例0.400),試驗(yàn)才有效,。3個(gè)陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,,則棄去,,而已另兩個(gè)陰性對照重新計(jì)算NCX;如有兩個(gè)陰性對照A值超出以上范圍,則該次實(shí)驗(yàn)無效,。陽性判定值按下式計(jì)算:
陽性判定值=NCX+0.05 標(biāo)本A值>陽性判定值的為陽性,,小于陽性判定值的為陰性。應(yīng)注意的是,,式中0.05為該試劑盒的常數(shù),,只適合于該特定條件下,而不是對各種試劑均可通用,。
根據(jù)以上敘述可以看出,,在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控作用,試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會產(chǎn)生"試驗(yàn)無效"的后果,。
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