所有產品僅供科研使用，不能用于食用和醫(yī)療等

人血管生成素2（Ang-2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍：                                                            96T
1µg/L -24µg/L
 
使用目的：
本試劑盒用于測定科研血清,、血漿及相關液體樣本中血管生成素2（ang-2）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人血管生成素 2（Ang-2）水平,。用純化的人血
管生成素 2（Ang-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入血管
生成素 2（Ang-2） ,，再與 HRP 標記的血管生成素 2（Ang-2）抗體結合，形成抗體-抗原-酶
標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,，
并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管生成素 2（Ang-2）呈正相
關,。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中人血管生成
素 2（Ang-2）濃度。  
試劑盒組成  
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標試劑  6ml×1瓶  8  標準品（48µg/L）  0.5ml×1 瓶
3  酶標包被板  12 孔×8條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張   
6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
人血管生成素2（Ang-2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒標本要求  
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
24µg/L  5 號標準品  150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
12µg/L  4 號標準品  150µl的5 號標準品加入150µl標準品稀釋液
6µg/L  3 號標準品  150µl的4 號標準品加入150µl標準品稀釋液
3µg/L  2 號標準品  150µl的3 號標準品加入150µl標準品稀釋液
1.5µg/L  1 號標準品  150µl的2 號標準品加入150µl標準品稀釋液
 
 
2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同） ,、標準孔、待測樣品孔,。 在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。    
4.  配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復 5次，拍干,。
6.  加酶：每孔加入酶標試劑50µl,，空白孔除外。  
7.  溫育：操作同3,。
8.  洗滌：操作同5,。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.  終止：每孔加終止液 50µl,，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
11.  測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） ,。 測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行。
操作程序總結：
 
 
計算
    以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式， 將樣品的OD值代入方程式,， 計算出樣品濃度,， 再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度,。  
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在5 分鐘內,，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存： ；2-8℃,。
2．有效期：6個月 
 
 

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