所有產(chǎn)品僅供科研使用,，不能用于食用和醫(yī)療等

睪酮檢測(cè)試劑盒
試劑盒使用說(shuō)明書
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測(cè)范圍：   96T 
0.4nmol/L   - 12nmol/L   
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定科研血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中睪酮（T）含量,。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人睪酮（T）水平。用純化的人睪酮（T）抗體包被微
孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入睪酮（T），再與HRP 標(biāo)記的睪酮（T）抗體
結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP
酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的睪酮（T）
呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人睪
酮（T）濃度,。  
試劑盒組成  
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標(biāo)試劑  6ml×1 瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品（24nmol/L ）  0.5ml×1 瓶
3  酶標(biāo)包被板  12孔×8 條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5 ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說(shuō)明書  1 份
5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11   封板膜  2 張    
6  顯色劑 B 液  6ml×1/ 瓶  12  密封袋  1 個(gè)
標(biāo)本要求  
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含 NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步驟
1.   標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋,。
12nmol/L   5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 15 0µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6nmol/L  4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3nmol/L  3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5 nmol/L   2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.7 5 nmol/L  1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
 2.   加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,，
然后再加待測(cè)樣品 10 µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡
量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.   溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。      
4.   配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.   洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此
重復(fù)5 次,，拍干,。
6.   加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外,。  
7.   溫育：操作同 3,。
8.   洗滌：操作同 5。
9.   顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.  終止：每孔加終止液50µl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11.  測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。  測(cè)定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
睪酮檢測(cè)試劑盒
操作程序總結(jié)：
計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實(shí)際濃度。  
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間
控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
10.  如與英文說(shuō)明書有異，以英文說(shuō)明書為準(zhǔn),。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6 個(gè)月 
    

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