PCR檢測微量感染因子時(shí)，容易因?yàn)槲廴镜亩鴮?dǎo)致各種問題,，因此,，進(jìn)行PCR操作時(shí)，操作人員應(yīng)該嚴(yán)格遵守一些操作規(guī)程,，zui大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn),。
（1）劃分操作區(qū)：目前，普通PCR尚不能做到單人單管,，實(shí)現(xiàn)*閉管操作,，但無論是否能夠達(dá)到單人單管，均要求實(shí)驗(yàn)操作在三個(gè)不同的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,，PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區(qū)內(nèi)進(jìn)行：
① 標(biāo)本處理區(qū),，包括擴(kuò)增摸板的制備；
② PCR擴(kuò)增區(qū)，包括反應(yīng)液的配制和PCR擴(kuò)增,；
③ 產(chǎn)物分析區(qū),，凝膠電泳分析，產(chǎn)物拍照及重組克隆的制備,。
各工作區(qū)要有一定的隔離,，操作器材，要有一定的方向性,。如：標(biāo)本制備→PCR擴(kuò)增→產(chǎn)物分析→產(chǎn)物處理,。
切記：產(chǎn)物分析區(qū)的產(chǎn)物及器材不要拿到其他兩個(gè)工作區(qū)。
（2）分裝試劑：PCR擴(kuò)增所需要的試劑均應(yīng)在裝有紫外燈的超凈工作臺(tái)或負(fù)壓工作臺(tái)配制和分裝,。所有的加樣器和吸頭需固定放于其中,，不能用來吸取擴(kuò)增后的DNA和其他來源的DNA：
① PCR用水應(yīng)為高壓的雙蒸水；
② 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)配制,；
③ 引物和dNTP應(yīng)分裝儲(chǔ)存,，分裝時(shí)應(yīng)標(biāo)明時(shí)間，以備發(fā)生污染時(shí)查找原因,。
(3) 實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng) 盡管擴(kuò)增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)的原因,，樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,，不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)是謹(jǐn)慎認(rèn)真,，在樣品的收集、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意：
① 戴一次性手套,，若不小心濺上反應(yīng)液,，立即更換手套；
② 使用一次性吸頭,，嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,，吸頭不要長時(shí)間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染,；
③ 避免反應(yīng)液飛濺,，打開反應(yīng)管時(shí)為避免此種情況，開蓋前稍離心收集液體于管底,。若不小心濺到手套或桌面上,，應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；
④ 操作多份樣品時(shí),，制備反應(yīng)混合液,，先將dNTP、緩沖液,、引物和酶混合好,，然后分裝,，這樣即可以減少操作，避免污染,，又可以增加反應(yīng)的度；
⑤ zui后加入反應(yīng)模板,，加入后蓋緊反應(yīng)管,；
⑥ 操作時(shí)設(shè)立陰陽性對照和空白對照，即可驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性,，又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性,；
⑦ 盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由于加樣器zui容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染,，使用可替換或高壓處理的加樣器,。如沒有這種特殊的加樣器，至少PCR操作過程中加樣器應(yīng)該,，不能交叉使用,，尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)區(qū)；
⑧ 重復(fù)實(shí)驗(yàn),，驗(yàn)證結(jié)果,，慎下結(jié)論。

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